DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽)是一種能夠與DNA中大部分A，T堿基相互結合的熒光染料。高濃度的DAPI可以穿透細胞膜，用于活細胞和固定細胞的染色。DAPI染色液常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測顯藍色。此外，DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色體DNA。

檢測原理

DAPI可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結合，產(chǎn)生比自身強20多倍的藍色熒光。DAPI也可對RNA進行染色，染色機理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA（Ex/Em=358 nm/461 nm），DAPI-RNA具有較長的最大發(fā)射波長（500 nm），其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。

使用方法

（1）DAPI儲存液及工作液的配置

儲存液的配置 ：DAPI分子量為350.25，配置5mg/mL（約14mM）的母液：用1mL無菌水將5mg DAPI完全溶解后分裝，-20℃凍存。

工作液的配置：使用1×PBS或培養(yǎng)基將恢復到室溫且完全融化的DAPI儲存液稀釋為5 μg/mL（約14 μM）的工作液（1:1000）。

注意：工作液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，可于4℃暫存，當天使用完。

（2）染色操作

• 對于細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。隨后如果需要進行免疫熒光染色，則先進行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進行DAPI 染色。如果不需要進行其它染色，則直接進行后續(xù)的DAPI 染色。

• 對于貼壁細胞或組織切片，加入少量DAPI 染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3 倍的染色液，混勻。

• 室溫放置3-5 分鐘，吸除DAPI 染色液，用TBST、PBS 或生理鹽水洗滌2-3 次，每次3-5 分鐘。

• 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細胞發(fā)生凋亡時，會看到凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

其他染料

除了DAPI 染色液外，常見的細胞核染料還包括以下幾種：

藍色：Hoechst 33342（活細胞）、Nuclear Violet LCS1（活細胞）、Nuclear Blue DCS1（死細胞）、DAPI（活&死細胞）；

綠色：SYTOX? Green（活細胞）、DMAO（活細胞）、Nuclear Green LCS1（活細胞）、Nuclear Green DCS1（死細胞）；

橙色及紅色：Nuclear Orange LCS1（活細胞）、Nuclear Orange DCS1（死細胞）、Nuclear Red LCS1 / LCS2（活細胞）、SYTO? 深紅色（活細胞）；

吖啶橙（死細胞）、PI（死細胞）、7-AAD（死細胞）、Ethidium Homodimer-1（死細胞）、Nuclear Red DCS1（死細胞）等。

注意事項

• DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

• 熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

• 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

• 低濃度的DAPI不容易穿透細胞膜。