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RNase抑制劑的分類與應(yīng)用

2025/8/21 14:36:34 作者:帝企鵝

RNA酶抑制劑是在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)的 RNase 抑制劑,可特異性抑制 RNase A、B、C 三種酶的活性。

RNA酶抑制劑,即核糖核酸酶(RNase)抑制劑, 是在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)的鼠源 RNase 抑制劑,分子大小為 50 kDa,能與 RNase 以非共價(jià)鍵的形式結(jié)合從而使 RNase 失活。通過(guò)非競(jìng)爭(zhēng)性方式與 RNase A、B、C 特異性結(jié)合,從而抑制這三種酶的活性;當(dāng)加入尿素或巰基類試劑時(shí),抑制劑失活,RNase A、B、C 復(fù)性。但有的產(chǎn)品不能抑制 RNase 1、RNase T1、S1 核酸酶、RNase H 或來(lái)源于曲霉屬的RNase,且當(dāng)與 Taq DNA 聚合酶、AMV 或 M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶或噬菌體 RNA 聚合酶(SP6,T7 或 T3)共同使用時(shí)對(duì)聚合酶活性無(wú)抑制作用。

RNase抑制劑

RNase分類

(一)核糖核酸酶A

核糖核酸酶A(RNase A)來(lái)源于牛胰臟,是一種內(nèi)切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應(yīng)終產(chǎn)物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。

(二)核糖核酸酶T1

核糖核酸酶T1(RNase T1)來(lái)源于米曲霉(Aspergillus orjzae),它特異地作用于鳥嘌呤3’端磷酸,切割位點(diǎn)在鳥嘌呤的3’磷酸和相鄰核苷酸的5‘羥基之問(wèn)的磷酸二酯鍵,反應(yīng)終產(chǎn)物為3’鳥苷酸和末端帶3’鳥苷酸的寡核苷酸片段。

(三)核糖核酸酶H

核糖核酸酶H(RNase H)最早是從小牛胸腺組織中發(fā)現(xiàn)的,其編碼基因已被克隆到大腸桿菌中。它能特異地降解DNA:RNA雜交雙鏈中的RNA鏈,產(chǎn)生具有3’一OH和5’一磷酸末端的寡核苷酸和單核苷酸,它不能降解單鏈或雙鏈的DNA或RNA。

應(yīng)用特點(diǎn)

1. cDNA合成

2. RT-PCR

3. 體外轉(zhuǎn)錄/翻譯

4. 酶切 RNA 標(biāo)記反應(yīng)

5. 其他需要 RNA 完整性的應(yīng)用

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