背景[1-7]
非酶DNA清除劑是一種使用破壁酶(Lyticase)消化去除酵母細胞壁，然后采用一種新型的酵母質粒純化柱實現(xiàn)從酵母細胞中進行小量質粒快速抽提的試劑盒。非酶DNA清除劑本實驗方法的基本原理是，在高鹽狀態(tài)下，硅膠膜專一性地吸附DNA；而在低鹽或水溶液狀態(tài)下，DNA被洗脫下來。此法簡便快捷，可在30分鐘內同時提純二十多個樣品。
從3～5ml培養(yǎng)過夜的含高拷貝質粒的菌液中可以獲得10～20μg高純度的質粒DNA，用于酶切、轉化、DNA自動測序和手工測序等。用Trizol等方法提取的細胞總RNA樣品中經常會含有基因組DNA污染，這些污染會影響下游的RT-PCR和Northern雜交等實驗。目前最常用的RNase-freeDNase處理方法因DNase中所含殘留的RNase能破壞RNA完整性而具有很大缺陷。開發(fā)的非酶DNA清除劑不但徹底避免了RNase-free DNase的這一缺陷，同時還具有操作快速，穩(wěn)定性好和性價比高等諸多優(yōu)點，完全可以替代價格昂貴的RNase-free DNase。
特點：
1無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，12個樣品只需約1-1.5小時即可完成。
2試劑盒提供了破壁酶(Lyticase)，酵母收集后，加入Lyticase消化去除細胞壁，接著采用傳統(tǒng)堿裂法裂解細胞，然后將獲得的上清液轉移至結合柱結合DNA，經過離心快速洗滌，最后用洗脫液洗脫出酵母質粒DNA。
3由于采用了高濃度的破壁酶，無需再使用玻璃珠，可以避免因為玻璃珠的機械作用帶來的酵母基因組DNA污染。
非酶DNA清除劑純化柱可以結合的質粒量的上限約為20微克。質粒DNA的產量依賴于酵母攜帶質粒的拷貝數，酵母菌株以及生長條件。通常酵母質粒的拷貝數較低，1.5-5ml培養(yǎng)過夜的酵母抽提獲得的質粒DNA量約為1-3微克左右。高拷貝酵母質粒抽提時的得率會大大提高。抽提所得質粒的量與酵母培養(yǎng)濃度、質?？截悢怠⒔湍钙废档纫蛩赜嘘P。
應用[8][9]
非酶DNA清除劑可用于高純度RNA提取中的DNA的去除：
在擬南芥Flowering Locus T基因生物功能及其mRNA移動能力研究需要提取高純度的RNA。擬南芥開花誘導基因網絡主要是通過光周期途徑(photoperiod pathway)、春化途徑(vernalization PathWay)、自發(fā)途徑(autonomous pathway)和赤霉素途徑(GA pathway)等4個途徑進行的，有很多相關基因起作用，其中擬南芥FLOWERING LOCUS T(FT)基因在其成花信號基因網絡中起很重要的整合作用，在光周期誘導途徑中，擬南芥葉片中光受體與相關感光節(jié)律基因構成的生物節(jié)律鐘感受光周期信號，調控CONSTANS(CO)基因節(jié)律表達，CO基因在合適光周期調控下，將開花信號傳導至FT基因，引起葉片中FT基因表達，F(xiàn)T基因表達產物、FT mRNA單獨或相互作用，經韌皮部長距離運移到頂端分生組織，調節(jié)下游分生組織及花器官決定基因形成花芽開花。
FT基因在光周期及其它開花誘導途徑中起開花信號關鍵整合作用，也是現(xiàn)在已知在葉片中感受開花信號而長距離作用于頂端分生組織的基因。本試驗對擬南芥FT基因的研究取得了如下研究結果：采集16h長日照條件下始花期野生型擬南芥葉片為樣本，采用異硫氰酸胍法提取總RNA，利用RT-PCR法成功克隆得到擬南芥開花誘導遺傳網絡中關鍵的樞紐基因FLOWERING LOCUST(FT)，分析得到完整FT基因閱讀框序列，完整閱讀框架長度為528bp，經與NCBI GeneBank數據庫比對序列完全正確。
參考文獻
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[8]The VERNALIZATION 2 Gene Mediates the Epigenetic Regulation of Vernalization in Arabidopsis[J] . Anthony R. Gendall,Yaron Y. Levy,Allison Wilson,Caroline Dean. Cell . 2001 (4)
[9]劉旭新. 擬南芥Flowering Locus T基因生物功能及其mRNA移動能力研究[D].西北農林科技大學,2008.