背景[1-6]
RNA長效保存液是一種能高效抑制RNase活性的新型小分子混合物,用于防止RNase對RNA的降解作用。組織RNA長效保護液從新鮮組織細胞中提取RNA時，由于各種原因若不能馬上處理樣品，即使－70℃保存樣品中的RNA也不穩(wěn)定容易降解，而液氮保存既昂貴又不方便。RNA保護液是一種無毒的樣品儲存液，能迅速滲入新鮮組織細胞的胞漿迅速而強烈滅活生物樣品中的RNA酶，抑制RNA降解。
標本在4℃或室溫長時間保存，其中的RNA不會降解，免去使用液氮或超低溫冰箱的不便，從而有效地解決了樣品保存及運輸的問題。隨后可采用當今世界上各種常見的RNA抽提試劑如RNAtrip、TRIzol或用戶自備試劑提取樣品RNA。
組織RNA長效保護液使用范圍：
1.生物樣品已采集完畢，但由不可預測原因不能立即進行RNA提取。
2.異地生物標本保存和運輸。如野外采集動植物標本，異地運輸或郵寄標本等。
3.沒有低溫條件或低溫設備不可用。如冰箱故障意外停電等。
4.RNase含量特別豐富的組織如胰腺或脾臟，預先用RNA保護液進行預處理，可以獲得很好的結果。
5.珍貴樣品，取出部分RNA保護液處理過的樣品提取RNA，剩余樣品可繼續(xù)凍存于保護液中?？煞磸蛢鋈诓⒍啻稳?0次以上。
6.RNA表達分析，不同實驗RNA表達的時序變化可立即被RNA保護液固定，減少樣品誤差。
適用：新鮮生物組織和細胞，如動物組織、植物組織、臨床標本、胚胎、真核細胞、血液、細菌、酵母菌，病毒等。但不能用于已經保存冷凍組織和凍融后的組織。
產品特點：
1.高效抑制RNase，保存在RNAsaver中的RNA可以在抵抗100 ng/mL的RNase A的降解作用達36小時，
效果比人胎盤RNase抑制蛋白和RVC更有效。
2.耐高溫,100℃保溫30分鐘后活性不受任何影響。
3.抗氧化，不需要DTT。
4.有效pH范圍廣。
5.產品為淡紅色液體，可以-20℃保存兩年。
RNA長效保存液將直接用于溶解RNA沉淀(跟使用RNase-free水一樣)，然后放置在適當溫度下保存(一般在-20℃)。保存在RNApreserve中的RNA可以直接電泳，不影響Northern雜交。但由于RNA保存液會抑制后續(xù)酶反應，所以如果RNA要用于RT-PCR等反應，需要預先用LiCl沉淀去除RNA保存液(將1/3倍體積的LiCl加入溶液中，4℃12000～15000g離心20-30分鐘，棄上清，用75%乙醇洗一次既得RNA沉淀)。
應用[7][8]
RNA長效保存液可用于RNA及RNA樣本的長期保存：
RNA固定劑、固定時間及溫度對RNA病毒感染組織總RNA的完整性、得率及病毒RNA擴增的影響。以及固定劑和固定時間對石蠟包埋組織中RNA降解和標本病理形態(tài)學的影響。方法：取漢坦病毒76—118株接種乳鼠的感染組織，以沉淀脫水類固定劑100％甲醇、75％乙醇、100％丙酮以及醛類固定劑4％的多聚甲醛磷酸緩沖液(4％PFA)、10％福爾馬林共五種固定劑，分別在4℃和室溫下固定病毒感染組織6h、12h、24h和48h后，對固定后標本進行如下檢測或處理：
1、從固定6h～48h后的標本中直接提取組織總RNA，用瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA完整性；以分光光度計測吸光度計算組織總RNA得率；用巢式RT—PCR擴增病毒RNA序列，電泳檢測PCR產物并行灰度掃描。對RNA得率及PCR產物電泳所測灰度值進行統(tǒng)計學分析。2、將固定后的病毒感染組織標本進行石蠟包埋長期保存。對石蠟包埋組織切片后HE染色，鏡下觀察各種固定劑對組織病理形態(tài)學的影響。
從長期保存的各種方式固定后石蠟包埋組織中以RT—PCR擴增出不同片段長度的病毒RNA及β-actin RNA序列，以獲得產物長度或對長片段擴增的可重復性及假陰性的多少，來反映各種固定方式對病毒RNA和細胞總RNA降解的影響。結果：
1、病理切片結果顯示，經10％福爾馬林和4％PFA固定的石蠟切片，組織結構完整清晰。其他三種沉淀脫水類固定劑固定后組織有不同程度收縮，但不影響組織病理形態(tài)學檢測，其中甲醇固定的收縮程度最小。
2、固定標本直接提取RNA結果，(1)RNA完整性：與立即冰凍或新鮮組織比較，100％甲醇固定24h，RNA完整性損傷不明顯；75％乙醇、100％丙酮固定12h后RNA開始出現(xiàn)損傷帶，24h出現(xiàn)明顯的損傷；而10％福爾馬林、4％PFA固定6h就開始出現(xiàn)明顯的損傷，固定24 h幾乎很難看清RNA條帶。
(2)RNA得率析因分析結果顯示，不同固定劑、固定時間、固定溫度下固定的組織中所提RNA的得率有顯著性差異(P＜0.01)，沉淀類固定劑固定后組織RNA得率明顯高于醛類固定劑(P＜0.01)；三種沉淀類固定劑之間差別無統(tǒng)計學意義伊>0.01);4%PFA高于10%福爾馬林(P<0.01)。固定劑、固定時間和固定溫度之間有顯著性交互作用(P<0.01)，4℃甲醇固定6h的RNA得率最高，10%福爾馬林在室溫下固定48h得率最低。
參考文獻
[1]Rapid differentiation between Hantaan and Seoul viruses by polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis.Kim EC,Kim IS,Choi Y,et al.Journal of Medical Virology.1994
[2]Detection of HCV-RNA in paraffin-embedded liver biopsies from patients with autoimmune hepatitis.Savage K,Dhillon AP,Schmilovitz-Weiss H,et al.Journal of Hepatology.1995
[3]Epstein-Barr virus and human hepatocellular carcinoma.Shamim A,Huifeng L,Ramesh P,et al.Cancer Letters.2003
[4]Epstein-Barr virus and human hepatocellular carcinoma.Akhter S,Liu H,Prabhu R,et al.Cancer Letters.2003
[5]Relman.Detection and Identification of Previously Unrecognized Microbial Pathogens.David A.Emerging Infections.1998
[6]Relman.Detection and Identification of Previously Unrecognized Microbial Pathogens.David A.Emerging Infections.1998
[7]Differentiation between porcine epidemic diarrhea virus and transmissible gastroenreritis virus in formalin-fixed paraffin-embedded tissues by multiplex RT-nested PCR and comparison with in situ hybridization.Jung K,Kim J,Kim O,et al.Journal of Virology.2003
[8]賀莉萍.RNA病毒感染組織標本保存方法探討[D].武漢大學,2004.