順式-已二烯二酸又稱順式-2,4-己二烯二酸或順，順-粘康酸，是一種重要的有機化合物。淺棕色粉末，它是肺炎克雷伯菌的代謝中間體，可轉(zhuǎn)化為己二酸和對苯二甲酸，這兩種物質(zhì)是合成聚合物的重要單體。順式-已二烯二酸作為己二酸前體，可用于合成尼龍-6,6等塑料和聚合物。

制備方法^[1]

1、酶的制備

產(chǎn)鄰苯二酚1,2-雙加氧酶的菌株為假單胞菌(Pseadmonas sp.)一般在5℃以下保存。使用時首先在牛肉汁洋菜斜面上活化，在30℃溫箱中，培養(yǎng)24小時，然后將斜面菌種接在種子瓶中，在30℃搖床上培養(yǎng)24小時，得到種子液。在搖瓶中加30%體積的培養(yǎng)基，再加種子液，在30°C搖床上培養(yǎng)72小時，即得到鄰苯二酚1，2-雙加氧酶的酶液。發(fā)酵液培養(yǎng)基的百分比組成為:苯甲酸鈉0.15、琥珀酸鈉0.27、KH₂PO₄0.2、Na₂HPO₄0.2、(NH₄)SO₄0.1、微量Mg²⁺、Ca²⁺、Fe²⁺和Mn²⁺。

2、固定化酶的制備

將以上鄰苯二酚1，2-雙加氧酶的酶液調(diào)至微酸性，將已活化的固定化載體按4-6%(W/V)加入，在室溫下攪拌1-2小時，酶即掛到載體上制成了固定化酶。這一步的酶活收率為85-90%。

3、順式-已二烯二酸的酶法合成

將上述固定化酶裝在柱子中，通過循環(huán)泵將柱與底物溶液槽相連，如圖1所示。底物溶液中包含鄰苯二酚和緩沖液，PH為中性。通過循環(huán)泵使底物溶液通過固定化酶柱，在酶的催化下，鄰苯二酚轉(zhuǎn)化為順式-已二烯二酸，多循環(huán)幾次，該反應(yīng)就進行完全了。將此產(chǎn)物溶液經(jīng)濃縮和干燥后，可得粉末狀順式-已二烯二酸樣品。也可將其溶于乙醇，形成順式-已二烯二酸結(jié)晶。上述固定化酶反應(yīng)是批式的，一批原料反應(yīng)完了，還可進行下批反應(yīng)，可多次反復(fù)反應(yīng)。該固定化酶可使用3-5天。

參考文獻

[1]中國科學(xué)院微生物研究所. 酶法合成順，順-己二烯二酸新工藝:CN93108610.8[P]. 1994-05-18.