背景及概述^[1]

血液總RNA小量提取試劑盒從小于1.5ml新鮮或凍藏的抗凝血液樣品中純化1-7ug總RNA。血液經(jīng)紅細(xì)胞裂解液(ERL)裂解去除紅細(xì)胞，加入TRKLysis Buffer裂解白細(xì)胞，經(jīng)70%乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件，過柱吸附RNA，經(jīng)過三步快速洗滌去雜質(zhì)，后RNA溶解于DEPC水中。

提純方法^[1]

與DNA提取相似，RNA的分離是去除像蛋白質(zhì)或者脂類一樣的其他分子。使用有機(jī)溶劑將RNA與這些污染物分開。然而，在處理RNA時(shí)有幾個(gè)方面與DNA不同。多數(shù)細(xì)胞類型在它們的細(xì)胞質(zhì)中與mRNA并存含有大量的RNA酶，它通常是分析提取的關(guān)鍵。為了阻止無處不在的RNA酶對(duì)mRNA的降解，分離必須即刻進(jìn)行并且細(xì)胞裂解物必須盡快置于RNA酶變性的環(huán)境中。強(qiáng)變性的異硫氰胍(GTC)可以被使用。新鮮的樣品或收集的組織可以被均漿并且大量地溶解在4mol/L的GTC溶液中。隨后RNA經(jīng)CsCl密度梯度離心沉淀并且和不能沉淀的DNA分離。接下來可用不同的方法來進(jìn)一步純化RNA。另一種方法，RNA也可以在變性鹽溶液(例如4mol/L的氯化鋰)中從均漿的組織中抽提。隨后，進(jìn)行酚抽提去除均漿物中的蛋白質(zhì)，然后用醇沉淀RNA。

特點(diǎn)^[1]

血液總RNA小量提取試劑盒具有下列特點(diǎn)：操作簡單快捷，直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品，不需要裂解紅細(xì)胞等任何預(yù)處理步驟，整個(gè)提取過程只需要十分鐘左右，可以全在室溫下進(jìn)行。1）純度高，OD260/OD280均在2.0左右，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。1）產(chǎn)率一般為2-5μg/mL人血。1）與常用的抗凝劑(包括肝素，EDTA，檸檬酸，草酸)兼容。血液總RNA小量提取試劑盒常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

主要參考資料

[1] 分子生物技術(shù)導(dǎo)論