背景及概述[1]
組織總RNA小量提取試劑盒用于動物組織，細胞，老鼠尾巴，石蠟包埋組織基因組DNA提取，硅膠膜純化技術，限度去除蛋白質(zhì)，多糖，脂類等雜質(zhì)，純度高，整個提取過程無需乙醇沉淀和酚/氯仿抽提。組織總RNA小量提取試劑盒可從多種細胞和組織中快速進行總RNA柱式純化。小于20分鐘的高質(zhì)量RNA；從單一的提取物中純化高達1,000微克的RNA；無害組織（酚/氯仿）提取液裂解。使用組織總RNA小量提取試劑盒分離獲得的總RNA可用于需要高質(zhì)量的總RNA的多種下游應用領域。
操作步驟[1]
1.將組織在液氮中磨碎成粉沫。每20~30mg組織加600ulBufferRL（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇），組織樣本少于20mg加350ulBufferRL。樣品體積不超過BufferRL體積的十分之一。
2.樣品充分裂解后，室溫放置5min，使蛋白核酸復合物完全分離。
3.12000rpm離心2~5min，取上清進行下步操作。
4.加入1倍體積（600ul或350ul）的70%乙醇（無RNase水配制），混勻。
5.將步驟4所得溶液全部加入到已裝入收集管（CollectionTube2ml）的吸附柱（SpinColumnCR）中，若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請分兩次轉入，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
6.向吸附柱中加入350μlBufferRD，10000rpm離心15sec，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7.配制DNaseI混合液：取52ulDEPC-H2O，向其中加入8ul10×DNaseIBuffer和20ulDNaseI（1U/ul），混勻，配制成終體積為80ul的DNaseI混合液。
8.向吸附柱中直接加入80ulDNaseI混合液，20~30℃孵育15min。
9.向吸附柱中加入350ulBufferRD，10000rpm離心15sec，棄廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
10.向吸附柱中加入500ulBufferRW，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
11.重復步驟10。
12.12000rpm離心2min，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，以徹底晾干。
13.將吸附柱置于一個新的無RNase離心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱的中間部位懸空加入30~50ulDEPC-H2O，室溫放置1min，12000rpm離心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
主要參考資料
[1] 現(xiàn)代醫(yī)學實驗技巧全書·上冊