簡介

RAW264.7是一種來源于小鼠的單核巨噬細胞系，具有典型的巨噬細胞生物學特性，廣泛應用于炎癥反應、免疫調節(jié)及相關疾病機制的體外研究。其對多種外界刺激敏感，可被殼寡糖（COS）等生物活性物質影響，且在200μM濃度下，不同聚合度的殼寡糖對細胞活力均無顯著毒性干擾，是研究天然產物抗炎、免疫調節(jié)活性的理想細胞模型之一。

RAW264.7的性狀

培養(yǎng)方法

（1）細胞培養(yǎng)

RAW264.7小鼠巨噬細胞在裝有完全培養(yǎng)基（補充有10%的FBS、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基）的細胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，并將其放置于溫度恒定為37℃、CO?濃度為5%的二氧化碳培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。每日通過倒置顯微鏡觀察細胞生長狀態(tài)，確保細胞保持良好的形態(tài)[1]。

（2）細胞復蘇

將裝有待復蘇的細胞的凍存管迅速放置于37℃的水浴鍋中解凍。使用鑷子夾住細胞凍存管的管身，輕輕晃動后，使其在1min左右融化，避免細胞在融化過程中因冰晶的產生而受損。使用75%酒精對該細胞凍存管外壁進行噴灑消毒處理，轉移至潔凈工作臺，然后在轉速為1000rpm條件下離心5min，棄去上清液，加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，盡量使其均勻分布。最后，將細胞轉移至裝有5mL完全培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%的CO?的二氧化碳培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，24h后更換新鮮培養(yǎng)基[1]。

（3）細胞傳代

當細胞形態(tài)圓潤，分化程度低且密度達到80%左右，即可進行傳代。首先，棄去舊培養(yǎng)基，使用2mL的PBS溶液輕輕洗去殘留培養(yǎng)基，再棄去PBS溶液。隨后加入4mL完全培養(yǎng)基，使用無菌細胞刮刀，輕輕刮下貼壁生長的細胞，并使用移液槍對細胞進行重懸至其均勻后，按1：2的傳代比例，將每2mL的細胞懸液轉移至裝有4mL完全培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)瓶中，放置于37℃、5%的CO?的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每48h傳代一次[1]。

殼寡糖對RAW264.7細胞活力的影響

RAW264.7細胞生長24h后細胞密度達到80%左右，細胞形態(tài)完整，貼壁良好，選擇該培養(yǎng)時間研究不同聚合度的殼寡糖（COS1-7）對RAW264.7細胞活力的影響。實驗結果顯示，在COS1-7濃度達400μM時對細胞活力未表現出抑制作用，這表明在本實驗條件下，COS1-7對細胞無明顯毒性作用。值得注意的是，當COS4濃度為400μM時，其對細胞活力具有輕微的促進作用（p<0.05），而在25μM至200μM的濃度范圍內，該作用并不顯著（p>0.05）。這一發(fā)現與以往的研究結果相一致。先前的研究表明，聚合度為2至6的殼寡糖（COS2-6）對RAW264.7細胞幾乎無毒性，并且在600μM的濃度下，甚至能夠促進細胞生長[1]。

參考文獻

[1] 趙夢婷. 聚合度對殼寡糖抑制LPS誘導RAW264.7產生炎癥的影響[D]. 廣西大學, 2025. DOI:10.27034/d.cnki.ggxiu.2025.003264.