4-硝基苯基-N-乙酰-beta-D-半乳胺是一種人工合成的?顯色性糖苷底物?，主要用于?β-N-乙酰半乳糖胺苷酶?的活性檢測與動力學研究。??

下游產(chǎn)物合成

1 4-硝基苯基 2-(乙酰氨基)-2-脫氧-4,6-O-[(S)-苯基亞甲基]-β-D-半乳糖苷，收率： 92% 取 4-硝基苯基 2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰基-2-脫氧-β-D-半乳糖苷 (5.09 mmol)， 無水DMF（30 mL）、苯甲醛二甲基縮醛（1.16 mL）和4-甲苯磺酸一水合物（90 mg）于100 mL圓底燒瓶中。將混合物接入減壓下的Biichi蒸發(fā)器中。將Biichi蒸發(fā)器置于50 °C的水浴中旋轉(zhuǎn)。在蒸汽導管中回流DMF。旋轉(zhuǎn)懸浮液3小時，直至形成澄清溶液。通過薄層色譜（TLC）檢查反應進度。將混合物倒入飽和的NaHCO?水溶液（200 mL）中。在室溫下攪拌混合物0.5小時。過濾白色沉淀。用水和二乙醚洗滌白色沉淀。在減壓下干燥白色沉淀。[1]

2 4-硝基苯基 2-(乙酰氨基)-6-O-(N-乙酰-α-神經(jīng)氨?；?-2-脫氧-β-D-吡喃半乳糖苷，收率： 92% 將對硝基苯基 β-D-半乳糖苷、丙酮酸鈉（1當量，10 mM）、一種唾液酸前體（N-乙酰甘露糖胺 1.2當量）、 丙酮酸鈉（6.0當量）和胞苷三磷酸（1.3當量）于裝有Tris-HCl緩沖液（100 mM，pH 8.8）和MgCl?（20 him）的50 mL離心管中，用水溶解。向混合物中加入適量的大腸桿菌唾液酸醛縮酶（0.2-0.75 mg）和腦膜炎奈瑟菌CMP-唾液酸合成酶（0.25-1.0 mg）。加入硅烷基轉(zhuǎn)移酶（0.05-0.2 mg PmST1）及水，使反應混合物的最終體積達到10 mL。將溶液置于培養(yǎng)箱中，在37 °C下以125 rpm攪拌孵育4-8小時，進行反應。通過薄層色譜（TLC）（乙酸乙酯/甲醇/水/乙酸 5:2:1:0.1，v/v/v/v，對苯甲醛糖染色）監(jiān)測產(chǎn)物形成情況。加入等體積的冰冷乙醇終止反應。將反應混合物在 4°C 下孵育 30 分鐘。離心混合物以去除沉淀。濃縮上清液。將上清液通過 BioGel P-2 凝膠過濾柱，以獲得目標產(chǎn)物。進行硅膠純化（Teac/Meow/H?O 5:2:1）。

3 4-硝基苯基 2-2-(乙酰氨基)-2-脫氧-6-O-[N-(2-羥基乙?；?-α-神經(jīng)氨?；鵠-β-D-吡喃半乳糖苷，收率： 85% 將對硝基苯基 β-D-吡喃半乳糖苷、丙酮酸鈉（1當量，10 mM）、一種唾液酸前體（N-乙?；事短前费苌?1.2當量）、 丙酮酸鈉（6.0當量）和胞苷三磷酸（1.3當量）用水分解，加入到含有Tris-HCl緩沖液（100 mM，pH 8.8）和MgCl?（20 him）的50 mL離心管中。向混合物中加入一定量的腸桿菌唾液酸醛縮酶（0.2-0.75 mg）和腦膜炎奈瑟菌 CMP-唾液酸合成酶（0.25-1.0 mg）。加入硅烷基轉(zhuǎn)移酶（0.05-0.2 mg PmST1）及水，使反應混合物的最終體積達到10 mL。將溶液置于培養(yǎng)箱中，在37 °C下以125 rpm攪拌孵育4-8小時，進行反應。通過薄層色譜（TLC）（乙酸乙酯/甲醇/水/乙酸 5:2:1:0.1，體積比，對苯甲醛糖染色）監(jiān)測產(chǎn)物形成情況。加入等體積的冰冷乙醇終止反應。將反應混合物在 4°C 下孵育 30 分鐘。離心混合物以去除沉淀。

參考文獻

[1] Chen, Hong-Ming; et al Syntheses of the 3- and 4-thio analogues of 4-nitrophenyl 2-acetamido-2-deoxy-β-D-gluco- and galactopyranoside Carbohydrate Research (2007), 342(15), 2212-2222