L6成肌細胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物最初兩代中分離得到。L6細胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降；因而，L6細胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。L6成肌細胞是由Yaffe從甲基膽蒽存在下大鼠大腿肌的原代培養(yǎng)物最初兩代中分離得到。L6細胞在培養(yǎng)基中可融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維。L6細胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降；因而，L6細胞應(yīng)冷凍于低代次階段并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。如果讓培養(yǎng)容器中的細胞長滿，L6細胞的成肌組分將迅速耗盡。大鼠

成肌細胞樣，貼壁生長

大鼠骨骼肌

1） 配制完全培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基+胎牛血清+雙抗（特殊培養(yǎng)基特殊配置）；

2） 細胞復(fù)蘇：取5ml完全培養(yǎng)基于15ml離心管中，37℃水浴鍋預(yù)熱，從液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出凍存的細胞，放入37℃水浴鍋中，搖晃使快速化凍（1min左右），然后將化凍的細胞和預(yù)熱的培養(yǎng)基，移入超凈工作臺中，化凍的細胞加入到含預(yù)熱培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3） 吸棄上清，得到細胞沉淀，用2ml完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，加入到T25培養(yǎng)瓶中，做好標記，放入37℃，5%CO2飽和適度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（培養(yǎng)皿復(fù)蘇效果更好）；

4） 24h后，觀察細胞貼壁情況（未貼壁的即為死細胞--針對貼壁細胞），吸棄舊培養(yǎng)基，加入新鮮的預(yù)熱（室溫或37℃）的完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁生長（Adherent）1天（1 Day）成肌細胞,樣， 貼壁生長轉(zhuǎn)化細胞系

1） 待細胞生長到80%-90%匯合度時，吸棄舊的培養(yǎng)基，加入1ml無菌PBS潤洗一次，以去除殘余的培養(yǎng)基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培養(yǎng)箱中消化（1~2min左右，不同細胞消化時間不同），取出細胞，鏡下觀察細胞至細胞皺縮變圓；

2） 加入1ml完全培養(yǎng)基（含F(xiàn)BS）終止消化，輕輕拍打，使細胞脫落下來成單個細胞懸液，收集細胞于15ml無菌離心管中，1000rpm，離心5min；

3） 收集細胞沉淀，完全培養(yǎng)基重懸，一分為二（可根據(jù)細胞生長速度調(diào)整比例），分別加入到2個新的培養(yǎng)瓶中，做好標記，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。