破骨細(xì)胞（Osteoclast，OC）是體內(nèi)唯一的具有骨吸收活性的多核細(xì)胞，具有2-50個(gè)細(xì)胞核，直徑100μm左右。破骨細(xì)胞由血液及骨髓中的單核/巨噬細(xì)胞系分化而來(lái)，其分化過(guò)程經(jīng)歷破骨細(xì)胞前體（osteoclast precursor cells，OPCs，或稱preosteoclasts）、融合的多核破骨細(xì)胞（non-functional polykaryons）、成熟破骨細(xì)胞（mature osteoclasts，也稱極化的多核破骨細(xì)胞）等幾個(gè)階段。骨骼是一種動(dòng)態(tài)組織，在結(jié)構(gòu)應(yīng)力和人體對(duì)鈣的需求等影響下，骨骼不斷被分解和重組。破骨細(xì)胞是骨骼持續(xù)破壞的介質(zhì)，在骨發(fā)育、生長(zhǎng)、修復(fù)、重建中具有重要的作用。破骨細(xì)胞的異常激活會(huì)導(dǎo)致骨丟失，常見于如絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病。
破骨細(xì)胞(osteoclast，亦稱bone-resorbing cells)是骨組織成分的一種，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞（osteoblast，亦稱bone-forming cells）在功能上相對(duì)應(yīng)。二者協(xié)同，在骨骼的發(fā)育和形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。高表達(dá)的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和組織蛋白酶K（cathepsin K)是破骨細(xì)胞主要標(biāo)志1) 組織來(lái)源于人的骨髓或者外周血組織。本細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細(xì)胞后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不要進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。人破骨細(xì)胞采用機(jī)械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)法制備而來(lái)，人破骨細(xì)胞分離自骨組織和骨髓；破骨細(xì)胞是骨組織中的多核巨細(xì)胞，位于骨組織表面的淺凹處。破骨細(xì)胞(osteoclast，亦稱bone-resorbing cells)是骨組織成分的一種，行使骨吸收（bone resorption）的功能。破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞（osteoblast，亦稱bone-forming cells）在功能上相對(duì)應(yīng)。二者協(xié)同，在骨骼的發(fā)育和形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。高表達(dá)的抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase)和組織蛋白酶K（cathepsin K)是破骨細(xì)胞主要標(biāo)志。破骨細(xì)胞占據(jù)骨頭表面的小凹陷，稱為Howship腔隙；這種腔隙被認(rèn)為是由破骨細(xì)胞的酶對(duì)骨骼的侵蝕引起的。破骨細(xì)胞產(chǎn)生許多酶，其中主要是抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acidic phosphatase, Trap），Trap特異地分布于破骨細(xì)胞中，為破骨細(xì)胞所特有，通常作為鑒別破骨細(xì)胞的重要標(biāo)志物1:2傳代將分離純化的大鼠周圍血單個(gè)核細(xì)胞，用含10％FBS、50ng／mlRANKL、20ng ／mlM－CSF、100U／ml青霉素、100U／ml鏈霉素的 α－MEM培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個(gè)／ml。再將配制好的細(xì)胞懸液接種到6孔培養(yǎng)板與直徑35 mm培養(yǎng)皿中。直徑35mm培養(yǎng)皿用于活細(xì)胞工作站動(dòng)態(tài)跟蹤成像，6孔培養(yǎng)板置 于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，在37℃、5％CO2、飽和濕度下連續(xù)培養(yǎng)，用上述含RANKL、M－CSF的α-MEM 培養(yǎng)液換液，每3日1次。同時(shí)對(duì)整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程作相差顯微鏡觀察與活細(xì)胞成像，培養(yǎng)14 d作抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色。大鼠周圍血單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)RANKL、M－CSF 誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，形成大量貼壁的多核破骨細(xì)胞后，從培養(yǎng)箱中取出，將培養(yǎng)液吸凈，加入37 ℃預(yù)溫的D－Hank＇s液，沖洗2次，再滴加足量的0.25％胰蛋白酶液，使其覆蓋整個(gè)底面，置于37 ℃培養(yǎng)箱中消化5min后取出，震蕩1min左右，在倒置相差顯微鏡下觀察，當(dāng)大部分細(xì)胞收縮懸起后，加入α－MEM完全培養(yǎng)液終止消化，用吸管反復(fù)抽吸吹打，將細(xì)胞混勻后移入15ml離心管，2000r／min，離心5min，去上清，用含RANKL、M－CSF的α－MEM完全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞， 調(diào)整濃度至1×105個(gè)／ml，接種細(xì)胞至6孔培養(yǎng)板與直徑35mm 培養(yǎng)皿中。同時(shí)對(duì)消化與貼壁過(guò)程作活細(xì)胞成像觀察，3d后作TRAP染色。人骨髓人破骨細(xì)胞采用機(jī)械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)法制備而來(lái)。按破骨細(xì)胞傳代方法，將誘導(dǎo)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，2000r／min，離心5min，去上清，用DMSO、FBS、α－MEM 按1∶2∶7 比例配制的凍存液，重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至5×106個(gè)／ml，加入凍存管，每支1.5ml，用凍存罐在溫度為－80℃冰箱中放置24h，再移至－196 ℃液氮中凍存。貼壁生長(zhǎng)從液氮中取出凍存的破骨細(xì)胞，迅速在 37 ℃水浴中震蕩融解，將融解的細(xì)胞懸液加入15ml離心管中，再加6ml α－MEM完全培養(yǎng)液，混勻，2000r／min，離心5min，去上清，用含RANKL、M－CSF 的α －MEM完全培養(yǎng)液，按1×105個(gè)／ ml的細(xì)胞濃度重懸后，分別接種到6孔培養(yǎng)板與直徑35mm培養(yǎng)皿中。同時(shí)對(duì)接種后的貼壁過(guò)程作活細(xì)胞成像觀察，3d后作TRAP染色。不規(guī)則細(xì)胞樣，圓形細(xì)胞樣