大鼠總膽汁酸(TBA)ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠總膽汁酸(TBA)水平。用純化的大鼠總膽汁酸(TBA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入大鼠總膽汁酸(TBA)，再與HRP標(biāo)記的總膽汁酸(TBA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總膽汁酸(TBA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠總膽汁酸(TBA)濃度。

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

本試劑盒用于測(cè)定魚血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中總膽汁酸(TBA)的含量。1、組織標(biāo)本 對(duì)于樣本要求保持鮮重，稱取樣本中的重量不小于50mg，一般以1g為基準(zhǔn),但不嚴(yán)格要求固定樣本每個(gè)重量必須達(dá)到相同的水平。勻漿的比例選取10%，相當(dāng)于1g組織加9ml的勻漿液來進(jìn)行勻漿。勻漿液選取PBS（PH=7.2-7.4，濃度為0.01mol/L）。勻漿過程選用組織勻漿器，冰浴上勻漿。(或者進(jìn)行液氮碾磨)，離心取上清，離心轉(zhuǎn)速選用5000轉(zhuǎn)每分，時(shí)間是15分鐘。取上清液待檢。 2-1、貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì) 胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個(gè)細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸并通過反 復(fù)凍融使細(xì)胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)。 2-2超聲波破碎條件：用20kHz頻率，150W的功率，在冰浴中進(jìn)行超聲波破碎，每破碎2s，間隔3s，反復(fù)破碎三次。 2-3反復(fù)凍融：收集細(xì)胞懸液，4℃低溫離心（3000rpm，5min），棄上清，加入一定量PBS（200ul），輕輕吹打混勻，-20℃ 冷凍30 min，37℃解凍，如此反復(fù)3次，可形成細(xì)胞裂解液。 3、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 4、不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。