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人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT

人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT

中文名稱人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT
中文同義詞人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT;IRAK ELISA KIT
英文名稱Human interleukin receptor associated kinase,IRAK ELISA Kit
英文同義詞Human interleukin receptor associated kinase,IRAK ELISA Kit
CAS號
分子式
分子量0
EINECS號
相關(guān)類別
Mol文件Mol File
結(jié)構(gòu)式人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT 結(jié)構(gòu)式

人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT 性質(zhì)

人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)ELISA KIT 用途與合成方法

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)的含量。本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)水平。用純化的白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入白介素受體相關(guān)激酶(IRAK),再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)含量。1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。 2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。 3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。 2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。 4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。 5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。 8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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MSDS信息

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