病毒包裝
病毒包裝 性質
病毒包裝是一種基因診斷、基因治療技術。因為目的基因不能直接整合到大多數真核細胞,常用的手段是將目的基因包裝成病毒來感染細胞,從而使表達滿足實驗需求。
病毒包裝所用的病毒有很多種,常見的有慢病毒和腺病毒。慢病毒(Lentivirus)是逆轉錄病毒的一種。構建的siRNA / miRNA慢病毒載體,與化學合成的siRNA 和基于瞬時表達載體構建的普通 siRNA 載體相比,一方面可以擴增替代瞬時表達載體使用,另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆經過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉染試劑難于轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態(tài)的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩(wěn)定表達。
腺病毒(Adenovirus,Ad)是一種無包膜的線狀雙鏈DNA病毒,其復制不依賴于宿主細胞的分裂。有近50個血清型,大多數Ad載體都是基于血清型2和5,通過轉基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的復制能力。這些重組病毒僅在高水平表達E1和E3基因的細胞中復制,因此是一種適用于治療的高效控制系統(tǒng)。
病毒包裝的關鍵節(jié)點:
細胞因素、載體系統(tǒng)(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng))、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制(24、48 小時的細胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因對病毒包裝影響 (基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影響到是否能包裝成功)。
病毒包裝利用病毒載體對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,病毒基因組整合于宿主基因組,可長時間、穩(wěn)定表達外源基因。