雙抗體夾心法本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中激肽釋放酶原(PK) 的含量。人本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人激肽釋放酶原(PK) 水平。用純化的激肽釋放酶原(PK) 捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入激肽釋放酶原(PK) ，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的激肽釋放酶原(PK) 呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中激肽釋放酶原(PK) 含量。1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。 2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。 2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。 4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。 5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。 8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 9. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。可檢測樣本中人的PK，且與其類似物無明顯交叉反應。激肽釋放酶原(PK)也被稱為弗萊徹因子，是一種絲氨酸蛋白酶，與高分子量的激肽原復合。它是血漿卡利克酶的前體，是一種激活激肽的絲氨酸蛋白酶。它被激活的XII因子（Hageman因子）裂解，產(chǎn)生卡利克雷因。遺傳性PK缺陷是非常罕見的。它們可以導致APTT延長，這可以通過培養(yǎng)病人的血漿而得到糾正。PK缺陷也可因某些疾病狀態(tài)而獲得，如血管性水腫、感染、DIC和鐮狀細胞病。