UMNSAH/DF-1 雞胚胎成纖維細(xì)胞系
簡(jiǎn)介細(xì)胞簡(jiǎn)介傳代方法傳代比例細(xì)胞凍存種屬組織來(lái)源生長(zhǎng)特性年齡細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞類型細(xì)胞傳代 專題
| 中文名稱 | UMNSAH/DF-1 雞胚胎成纖維細(xì)胞系 |
|---|---|
| 中文同義詞 | UMNSAH/DF-1 雞胚胎成纖維細(xì)胞系;UMNSAH/DF-1細(xì)胞:雞胚胎成纖維細(xì)胞系;UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維復(fù)蘇細(xì)胞(附STR鑒定報(bào)告);UMNSAH/DF-1(雞胚成纖維細(xì)胞);UMNSAH/DF-1 細(xì)胞| UMNSAH/DF-1 雞胚成纖維細(xì)胞;UMNSAH/DF-1細(xì)胞;雞胚成纖維細(xì)胞(活細(xì)胞順豐包郵,或可供凍存管);UMNSAH/DF-1雞胚成纖維細(xì)胞庫(kù)|培養(yǎng)基|帶STR圖譜 |
| 英文名稱 | UMNSAH/DF-1 |
| 英文同義詞 | Chicken UMNSAH/DF-1;UMNSAH/DF-1 |
| CAS號(hào) | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS號(hào) | |
| 相關(guān)類別 | 生物試劑;細(xì)胞系;細(xì)胞系-雞細(xì)胞系;細(xì)胞-細(xì)胞系;細(xì)胞生物學(xué)-細(xì)胞系 |
| Mol文件 | Mol File |
| 結(jié)構(gòu)式 |
UMNSAH/DF-1 雞胚胎成纖維細(xì)胞系 性質(zhì)
UMNSAH/DF-1是一種自發(fā)永生化的雞細(xì)胞系。將原代雞胚成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng);成纖維細(xì)胞被傳代直到它們開(kāi)始衰老;細(xì)胞衰老期間進(jìn)行濃縮，保持約30% ~約60%的培養(yǎng)合度。這些細(xì)胞可作為病毒繁殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的底物。UMNSAH/DF-1是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細(xì)胞株，自發(fā)永生化。 分離原代雞胚成纖維細(xì)胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)；傳代直到衰老；在衰老過(guò)程中離心以保持細(xì)胞培養(yǎng)在30%到60%滿；不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。 在軟瓊脂上沒(méi)有觀察到克隆增殖，說(shuō)明這些細(xì)胞是永生化而沒(méi)有轉(zhuǎn)化。 這株細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。
細(xì)胞在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)陰性（可供檢測(cè)報(bào)告）。
細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果：陰性；真菌檢測(cè)結(jié)果：陰性UMNSAH/DF-1細(xì)胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞成纖維細(xì)胞株，自發(fā)永生化。分離的原代雞胚成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中保持細(xì)胞在30%到60%密度，傳代直到衰老，不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒(méi)有觀察到克隆增殖，說(shuō)明UMNSAH/DF-1細(xì)胞是永生化而沒(méi)有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時(shí)加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
細(xì)胞在本庫(kù)通過(guò)支原體檢測(cè)陰性（可供檢測(cè)報(bào)告）。
細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果：陰性；真菌檢測(cè)結(jié)果：陰性UMNSAH/DF-1細(xì)胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞成纖維細(xì)胞株，自發(fā)永生化。分離的原代雞胚成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中保持細(xì)胞在30%到60%密度，傳代直到衰老，不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒(méi)有觀察到克隆增殖，說(shuō)明UMNSAH/DF-1細(xì)胞是永生化而沒(méi)有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時(shí)加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
1）準(zhǔn)備DMEM（NaHCO3 1.5g/L）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%；細(xì)胞凍存后復(fù)蘇存活率只有50%左右，建議加大凍存密度。
2）UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞系培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：39℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞系凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
雞胚胎，自發(fā)永生化貼壁生長(zhǎng)（Adherent）10天（10FD）成纖維細(xì)胞樣， 貼壁生長(zhǎng)復(fù)蘇UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞系細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。自發(fā)永生化細(xì)胞UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于39℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。