本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人EPO抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）中的人EPO會與包被抗體結(jié)合。后依次加入生物素化的抗人EPO抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，抗人EPO抗體與結(jié)合在包被抗體上的人EPO結(jié)合，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測OD值，EPO濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中EPO的濃度。