本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人IL-35抗體包被于酶標板上，實驗時樣品（或標準品）中的人IL-35會與包被抗體結合。后依次加入生物素化的抗人IL-35抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素，抗人IL-35抗體與結合在包被抗體上的人IL-35結合，生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450 nm波長處測OD值，IL-35濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中IL-35的濃度。