產(chǎn)品簡介：

      慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因治療載體。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達(dá)shRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達(dá)shRNA，實現(xiàn)在多種類型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達(dá)的功能性沉默，為在原代的人和動物細(xì)胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產(chǎn)生特定基因表達(dá)降低的動物提供了可能性。慢病毒作為siRNA的攜帶者，不但具備特異性地使基因表達(dá)沉默的能力，而且充分發(fā)揮了慢病毒載體自身所具備的優(yōu)勢，為基因功能的研究提供了更強有力的工具。

簡要步驟：

1、慢病毒轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞實驗方法 
  （1）慢病毒轉(zhuǎn)染前18-24h，將貼壁細(xì)胞以1×105個/ml鋪到6孔板中。使細(xì)胞在慢病毒轉(zhuǎn)染時的數(shù)量為2×105個/ml左右。 
  （2）次日，用含有6 μg/ml polybrene的1ml新鮮培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基，加入適量病毒懸液。37℃孵育。
  （3）（對polybrene毒性敏感的細(xì)胞選作此步驟）8h-16h后，觀察轉(zhuǎn)染情況，更換新鮮培養(yǎng)基1ml/孔，37℃培養(yǎng)。
  （4）如果慢病毒含有熒光蛋白，一般轉(zhuǎn)染48小時后可見明顯熒光表達(dá)，72小時后更加明顯。如需FACS檢測轉(zhuǎn)染效率，可在轉(zhuǎn)染后72-96小時進行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選，可以在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥。

2、慢病毒轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞實驗方法  
  （1）在2×105個/ml懸浮細(xì)胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒，充分混勻。37℃孵育。 如果該細(xì)胞株不易受慢病毒感染，可以使用離心孵化的方法。即在細(xì)胞培養(yǎng)板上加入病毒感染液后在離心機上以2500rpm(1000-1500g)在32℃或者室溫下離心90min。
  （2）（對polybrene毒性敏感的細(xì)胞選作此步驟）8h-16h后，觀察轉(zhuǎn)染情況，更換新鮮培養(yǎng)基1ml/孔（6孔板），37℃培養(yǎng)。 
  （3）繼續(xù)培養(yǎng)1-3天。中間視細(xì)胞生長情況可傳代或換液。