一、雜質(zhì)研究
在雜質(zhì)研究方面的具有較強(qiáng)的專業(yè)能力，基于ICH
?
Q3指導(dǎo)原則建立完整的雜質(zhì)研究體系。解決中藥注射劑行業(yè)關(guān)鍵共性問題，研究、起草中藥注射劑科學(xué)合理、高標(biāo)準(zhǔn)、相對統(tǒng)一的安全性質(zhì)量檢測指標(biāo)研究技術(shù)規(guī)范。藥品的質(zhì)量指標(biāo)可分成安全性、有效性、穩(wěn)定性、均一性四個(gè)維度進(jìn)行評價(jià)，本文件的起草是參考《中藥注射劑安全性再評價(jià)質(zhì)量控制評價(jià)技術(shù)原則（試行）》的要求，在《中華人民共和國藥典》2020年四部通則“0102
?
注射劑”及《中藥注射劑安全性再評價(jià)質(zhì)量控制要點(diǎn)》要求質(zhì)量檢測的常規(guī)指標(biāo)“蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、鉀離子、細(xì)菌內(nèi)毒素（或熱原）、溶血與凝聚、異常毒性、過敏反應(yīng)、降壓物質(zhì)、熾灼殘?jiān)⒖梢姰愇?、不溶性微粒、無菌”基礎(chǔ)上，提高“殘留溶劑、元素雜質(zhì)”研究技術(shù)，并新增“5-羥甲基糠醛、吐溫-80含量控制、高分子物質(zhì)檢測、類過敏反應(yīng)”等更有安全性質(zhì)量檢測意義指標(biāo)的研究技術(shù)方法，為進(jìn)一步提高中藥注射劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，特別是安全性質(zhì)量控制提供技術(shù)保障。
雜質(zhì)控制策略
遺傳毒性雜質(zhì)（ICH M7）研究策略
風(fēng)險(xiǎn)評估
控制策略
分析方法（高靈敏度）
限度計(jì)算（基于TTC）
研究方法
采用HPLC-MS/MS進(jìn)行組分鑒定
分離和鑒定各組分對照品
制定合理的組分限度
1、元素雜質(zhì)
基本方法：
一般優(yōu)先考慮采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS法）。以下具體方法如不適用，可根據(jù)各品種實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整。
儀器參數(shù)：
射頻功率：1550 W；蠕動泵轉(zhuǎn)速：0.3 rps； 等離子氣體：15 L/min；輔助氣體：0.2 L/min；載氣流速：1.05 L/min。
2、高分子物質(zhì)
高效分子排阻色譜法（HPSEC法）：采用《中華人民共和國藥典》（2025年版）四部通則“0512 高效液相色譜法”進(jìn)行測定。以下具體方法如不適用各品種，可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整。
以凝膠為填充劑（TSK
?G2000 SWxl凝膠色譜柱，7.8 mm×300 mm，5 μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱）；以乙腈-0.03%三氟乙酸溶液（30 : ?
70）為流動相；檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器或電霧式檢測器或紫外-可見分光檢測器（檢測波長為214 nm或其他最大吸收波長）
質(zhì)譜法（MS法）：采用《中華人民共和國藥典》（2025年版）四部通則“0431
?
質(zhì)譜法”進(jìn)行測定。離子源：選擇電噴霧離子化（ESI），或快原子轟擊（FAB）/快離子轟擊離子化（LSIMS），或基質(zhì)輔助激光解吸離子化（MALDI）；
?質(zhì)量分析器：選擇四級桿串聯(lián)飛行時(shí)間分析器（TOF），或其他可用于測定分子量在1000以上的串聯(lián)質(zhì)譜。
3、5-羥甲基糠醛
采用《中華人民共和國藥典》（2025年版）四部通則“0512
?高效液相色譜法”進(jìn)行測定。以下具體方法如不適用各品種，可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整。以氨基鍵合硅膠為填充劑（Shodex Asahipak ?
NH2P-504E為色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 ?
μm或效能相當(dāng)?shù)纳V柱）；以乙腈為流動相A，水為流動相B，按表6中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。
4、吐溫80
采用高效液相色譜法，凝膠色譜柱，
?柱溫為30 ℃； 以0.02 mol/L醋酸銨溶液-乙腈（90:10） 為流動相， 流速為0.6ml/min,蒸發(fā)光散射檢測器， ?
漂移管溫度120 ℃， 氮?dú)饬魉?.0L/min，建立樣品中吐溫80的含量可以有效控制制劑質(zhì)量。
二、特征圖譜/指紋圖譜
中藥注射劑指紋圖譜研究的核心是建立一種穩(wěn)定、專屬、信息豐富、可量化的化學(xué)表征方法。其技術(shù)鏈條貫穿
?“樣品代表性—方法科學(xué)性—驗(yàn)證嚴(yán)謹(jǐn)性—評價(jià)合理性—應(yīng)用關(guān)聯(lián)性” ?
。未來，隨著分析技術(shù)和數(shù)據(jù)科學(xué)的發(fā)展，指紋圖譜將從質(zhì)量控制工具，逐步升級為連接化學(xué)物質(zhì)群與臨床療效/安全性的核心科學(xué)研究平臺。
經(jīng)質(zhì)量研究明確結(jié)構(gòu)的成份，應(yīng)當(dāng)在指紋圖譜中得到體現(xiàn)，一般不低于已明確成份個(gè)數(shù)的90%；指紋圖譜應(yīng)當(dāng)全面反映注射劑所含成份的信息。
1、核心目標(biāo)與原則
整體性：體現(xiàn)中藥多組分協(xié)同作用的特點(diǎn)，對注射劑中盡可能多的化學(xué)成分進(jìn)行整體表征。
專屬性：圖譜必須能有效區(qū)分不同品種、不同廠家、不同批次的樣品，并能檢測到原料、工藝的微小變化。
穩(wěn)定性：方法需穩(wěn)定可靠，圖譜具有良好的重現(xiàn)性。
相關(guān)性：圖譜特征（峰群）應(yīng)與藥效/安全性建立關(guān)聯(lián)（譜效關(guān)系或譜毒關(guān)系），這是指紋圖譜研究的終極價(jià)值。
2、關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)
樣品制備與代表性：
必須收集足夠數(shù)量的代表性樣品（通?！?0批），包括：不同批次的合格成品。關(guān)鍵中間體（如提取物、濃縮液）。不同來源/產(chǎn)地的合格原料藥材（用于溯源）。工藝變動前后的樣品（用于工藝監(jiān)控）。
前處理優(yōu)化：
根據(jù)化學(xué)成分性質(zhì)（極性、酸堿性、揮發(fā)性等）優(yōu)化提取、富集、過濾等方法，確保能全面、穩(wěn)定地反映產(chǎn)品化學(xué)特征。
3、分析方法的建立與選擇
首選方法：
高效液相色譜法是最常用、最成熟的技術(shù)，尤其配合二極管陣列檢測器，可提供豐富的紫外光譜信息。
氣相色譜法：適用于揮發(fā)性成分（如揮發(fā)油等）。
毛細(xì)管電泳法：適用于離子型、大極性成分。
聯(lián)用技術(shù)：
HPLC-MS/MS（液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜）或 GC-MS（氣相色譜-質(zhì)譜）是核心技術(shù)趨勢，不僅能提供色譜峰，還能在線進(jìn)行成分鑒定，極大提升指紋圖譜的信息量和專屬性。
4、方法學(xué)驗(yàn)證
指紋圖譜分析方法必須進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證，包括：精密度、重復(fù)性、中間精密度。
穩(wěn)定性：考察樣品溶液在不同時(shí)間段的穩(wěn)定性。
耐用性：考察色譜柱、儀器、流動相比例微小變動對圖譜的影響。
系統(tǒng)適用性：明確關(guān)鍵分離度、理論塔板數(shù)、拖尾因子等要求。
5、參照物的選擇
內(nèi)參比峰：
選擇樣品中固有、穩(wěn)定、中等保留時(shí)間、含量適中的已知活性成分的色譜峰作為參照峰，用于計(jì)算相對保留時(shí)間和相對峰面積。
外標(biāo)物：
用于成分鑒別和含量測定，但不一定作為指紋圖譜的參照峰。
6、指紋圖譜的建立與評價(jià)
圖譜采集與數(shù)據(jù)處理：
在統(tǒng)一條件下采集所有代表性樣品的圖譜，進(jìn)行色譜峰識別、匹配和校準(zhǔn)。
共有模式生成：
通過統(tǒng)計(jì)分析（如均值法）生成能代表該品種特性的 “對照指紋圖譜”（或稱共有模式）。
直觀比對評價(jià)：
觀察樣品圖譜與對照指紋圖譜的整體相似性。
相似度評價(jià)：
采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（國家藥典委員會推薦），計(jì)算相關(guān)系數(shù)。相似度通常要求≥0.90（或企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)更高）。這是目前最核心的量化評價(jià)指標(biāo)。
多元統(tǒng)計(jì)分析：
采用主成分分析、聚類分析等模式識別技術(shù)，更深入地挖掘批次間的差異和一致性。
關(guān)鍵峰監(jiān)控：
確定一組 “特征峰”（如8-15個(gè)），并規(guī)定其相對保留時(shí)間的范圍和相對峰面積的比例范圍。
7、成分鑒定與譜效關(guān)聯(lián)
組分鑒定與定性：
未知成分結(jié)構(gòu)鑒定（分離純化未知對照品）、遺傳毒性雜質(zhì)評估、潛在雜質(zhì)預(yù)測、指紋圖譜對比分析。
色譜峰指認(rèn)/鑒定：
利用HPLC-MS/MS、對照品比對等技術(shù)，對主要色譜峰、尤其是特征峰進(jìn)行化學(xué)成分鑒定。這是提升指紋圖譜科學(xué)內(nèi)涵的關(guān)鍵。
譜效/譜毒關(guān)系研究：
將指紋圖譜的化學(xué)特征（如特征峰的峰面積）與藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)或毒性檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)分析（如灰色關(guān)聯(lián)度、偏最小二乘回歸等），尋找潛在的藥效物質(zhì)群或毒性預(yù)警成分。
三、多指標(biāo)成分含量測定
中藥注射劑多指標(biāo)含量測定的技術(shù)核心在于：以科學(xué)原則選擇關(guān)鍵質(zhì)控成分，建立并完全驗(yàn)證一個(gè)專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確精密的分析方法，并設(shè)定合理的含量限度。它與指紋圖譜共同構(gòu)成了保障中藥注射劑“安全、有效、質(zhì)量均一”的現(xiàn)代化學(xué)質(zhì)量控制體系的支柱，且正朝著更精準(zhǔn)、更高效、更關(guān)聯(lián)臨床的方向不斷發(fā)展。
1、明確核心原則與目標(biāo)
有效成份注射劑：單一主成份含量≥總固體的 90%。
多成份注射劑：所有“結(jié)構(gòu)明確成份”的總含量≥總固體的 60%。
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)覆蓋度要求：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的所有被測成份（即建立了含量測定項(xiàng)的成份）的總含量，應(yīng)≥總固體的80%。
控制邏輯：這構(gòu)成了一個(gè)遞進(jìn)的質(zhì)控框架——首先保證總體的化學(xué)物質(zhì)清晰度（目標(biāo)1和2），進(jìn)而確保質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能有效地代表和控制這個(gè)主體（目標(biāo)3）。
2、建立多指標(biāo)含量控制體系的操作流程
階段一：前期研究與分析（奠基階段）
確定“總固體”：通過干燥失重或熾灼殘?jiān)确椒ǎ瑴?zhǔn)確測定注射劑（扣除輔料后）的總固體含量（單位：mg/ml 或 %）。這是所有計(jì)算的基準(zhǔn)。
全面化學(xué)表征：運(yùn)用指紋圖譜（HPLC-DAD, LC-MS等）對注射劑進(jìn)行全成分掃描。盡可能多地指認(rèn)和鑒定色譜峰，明確其化學(xué)結(jié)構(gòu)。這是區(qū)分“結(jié)構(gòu)明確成份”與“未知成份”的基礎(chǔ)。
成分分類與篩選：將所有成分分為結(jié)構(gòu)明確成分（已鑒定）和
?
結(jié)構(gòu)不明確/未知成分（如聚合物、部分降解物、未知小峰等）。從“結(jié)構(gòu)明確成分”中，根據(jù)有效性（君藥、臣藥主要活性成分）、安全性（有毒成分限量）、代表性（覆蓋各藥味、各化學(xué)類型）三大原則，篩選出需要建立含量測定的候選指標(biāo)成分。
階段二：建立含量測定方法并驗(yàn)證
方法開發(fā)：通常采用HPLC多波長檢測或LC-MS/MS方法，以實(shí)現(xiàn)對多個(gè)化學(xué)性質(zhì)差異大的成分進(jìn)行同時(shí)、準(zhǔn)確的定量。
方法必須經(jīng)過完整的方法學(xué)驗(yàn)證（專屬性、線性、精密度、準(zhǔn)確度、耐用性等）。
測定各指標(biāo)成分的絕對含量：用已驗(yàn)證的方法，測定多批有代表性樣品中每個(gè)指標(biāo)成分的絕對含量（單位：mg/ml）。
階段三：計(jì)算、評估與指標(biāo)確定（核心決策階段）
這是將測定數(shù)據(jù)與您提出的要求進(jìn)行比對和決策的關(guān)鍵步驟。
計(jì)算“結(jié)構(gòu)明確成分總含量”：這是所有已鑒定成分的含量之和（不僅僅是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中測定的那幾個(gè)）。這需要基于全面的成分鑒定研究進(jìn)行估算，可能涉及使用“一測多評”或半定量手段來估算未建立法定含量測定方法的已知成分。
驗(yàn)證是否符合多成份制劑要求：（結(jié)構(gòu)明確成分總含量/總固體量）×100%≥60%。
如果低于60%，說明產(chǎn)品化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)不清晰，需要進(jìn)一步研究，優(yōu)化工藝以富集有效成分，或深化成分鑒定研究。
計(jì)算“質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制成分總含量”：這是指最終寫入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的那些含量測定項(xiàng)所測成分的含量之和。
決策與優(yōu)化：首先，計(jì)算當(dāng)前選定的幾個(gè)指標(biāo)成分的總和占總固體的百分比。如果該百分比≥80%，則已滿足要求。如果< 80%，則必須增加含量測定的指標(biāo)成分，直到總和超過80%的閾值。這意味著可能需要增加測定一些中等含量或次要活性成分。
案例推演（多成份注射劑）：假設(shè)某注射劑總固體為 100 mg/ml。
經(jīng)研究，其所有結(jié)構(gòu)明確成分的總含量為 70 mg/ml（占70%， > 60%，符合多成份制劑要求）。
初期選定3個(gè)主要成分A、B、C建立含量測定，其含量分別為：30, 20, 15 mg/ml，總和為 65 mg/ml（占65%， < 80%，不達(dá)標(biāo)）。
行動：需要增加至少一個(gè)含量≥15 mg/ml 的已知成分D進(jìn)入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。若D含量為10 mg/ml，則A+B+C+D = 75 mg/ml（占75%），仍不足。需繼續(xù)增加成分E（含量8 mg/ml），則總和達(dá)到83 mg/ml（>80%），達(dá)標(biāo)。
此時(shí)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中需包含對A、B、C、D、E五個(gè)成分的含量測定。
3、方法學(xué)驗(yàn)證
根據(jù)ICH、CP等指南，對定量方法進(jìn)行全面驗(yàn)證：
專屬性/特異性：證明目標(biāo)峰不受輔料、雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等干擾（通過與空白輔料、破壞性試驗(yàn)樣品對比，或使用MS檢測器確認(rèn)）。
線性與范圍：覆蓋待測成分可能含量范圍的80%-120%，相關(guān)系數(shù)r通常要求>0.999。
重復(fù)性：同一人、同一天、同一樣品多次進(jìn)樣的RSD。
中間精密度：不同日期、不同分析員、不同儀器的RSD。RSD一般要求≤2.0%（含量較高時(shí)）。
準(zhǔn)確度（加樣回收率）：在已知含量的樣品中加入低、中、高三個(gè)水平的對照品，計(jì)算回收率（通常要求95%-105%，RSD≤3%）。這是關(guān)鍵驗(yàn)證項(xiàng)。
檢測限與定量限：尤其對毒性成分或痕量成分，需驗(yàn)證方法的靈敏度。
耐用性：考察色譜柱品牌、柱溫、流速、pH值微小波動對測定結(jié)果的影響，確定方法的可操作空間。
溶液穩(wěn)定性：考察對照品溶液和供試品溶液在規(guī)定時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定性。
成都普思生物科技股份有限公司成立于2005年，是一家專注于天然產(chǎn)物分離純化及中藥藥學(xué)研究服務(wù)的國家高新技術(shù)企業(yè)。公司集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體。
主營業(yè)務(wù)涵蓋：藥用植物活性單體、標(biāo)準(zhǔn)對照品等天然化合物的技術(shù)研發(fā)及定制生產(chǎn)、銷售，化合物高分辨質(zhì)譜分析、化合物標(biāo)定、化合物結(jié)構(gòu)鑒定、中藥材檢測（CNAS認(rèn)可）、藥物雜質(zhì)分離、中藥新化合物發(fā)現(xiàn)與活性篩選研究、中藥新藥臨床前系統(tǒng)研究、經(jīng)典名方、改良型新藥及同名同方藥開發(fā)研究、組分中藥的配伍研究及高端制劑研究等技術(shù)外包服務(wù)，成功打造了國內(nèi)領(lǐng)先的天然藥物分離純化及中藥創(chuàng)新藥研發(fā)服務(wù)小試+中試平臺。亦可提供藥材研究、工藝研究、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究、穩(wěn)定性研究、對比研究的技術(shù)服務(wù)。