標(biāo)準(zhǔn)品是生化檢測(cè)定量結(jié)果的基準(zhǔn),需遵循"選擇確認(rèn)→溶液配制→梯度標(biāo)曲→上機(jī)檢測(cè)→數(shù)據(jù)校準(zhǔn)"五步規(guī)范使用,具體操作如下:?
一、使用前選擇與確認(rèn)
1、根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)選擇對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品,確保基質(zhì)與待測(cè)樣本匹配,避免基質(zhì)效應(yīng)干擾結(jié)果準(zhǔn)確性。
2、檢查標(biāo)準(zhǔn)品的有效期、純度和適用范圍,確認(rèn)量值溯源證書(shū)有效,過(guò)期或變質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品禁止使用。
二、標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制
1、固態(tài)標(biāo)準(zhǔn)品:使用十萬(wàn)分之一分析天平,通過(guò)增量法或減量法準(zhǔn)確稱量目標(biāo)重量,將標(biāo)準(zhǔn)品加入容量瓶后,按照說(shuō)明書(shū)要求加入對(duì)應(yīng)溶劑(甲醇、乙腈或水),定容至刻度搖勻。對(duì)于微量昂貴標(biāo)準(zhǔn)品,需多次蕩洗稱量瓶/標(biāo)準(zhǔn)品瓶,保證完全轉(zhuǎn)移。
2、液體標(biāo)準(zhǔn)品:可直接取用,若標(biāo)簽要求稀釋則按比例用對(duì)應(yīng)溶劑稀釋定容,注意準(zhǔn)確記錄稀釋倍數(shù)。
三、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(核心步驟)
1、將標(biāo)準(zhǔn)品溶液按照試劑盒指導(dǎo),稀釋成?包含空白、低、中、高濃度?的梯度溶液,濃度梯度需覆蓋待測(cè)物可能的濃度范圍。
2、每個(gè)濃度點(diǎn)設(shè)置2-3次平行測(cè)定,減少隨機(jī)誤差,提高數(shù)據(jù)可靠性。
3、按照試劑盒的反應(yīng)流程,完成加樣、孵育、顯色等操作,最后用對(duì)應(yīng)儀器(分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀)讀取每個(gè)濃度點(diǎn)的響應(yīng)值(吸光度/熒光強(qiáng)度等)。
四、定量檢測(cè)與結(jié)果校準(zhǔn)
1、將待測(cè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè),保持儀器參數(shù)、反應(yīng)環(huán)境一致,避免系統(tǒng)誤差。
2、以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),響應(yīng)值為縱坐標(biāo),通過(guò)線性回歸(或試劑盒要求的其他方法)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,要求線性相關(guān)系數(shù)?R2≥0.99?才能保證定量準(zhǔn)確。
3、將待測(cè)樣本的響應(yīng)值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式,直接計(jì)算出樣本中目標(biāo)物質(zhì)的濃度,若樣本提前稀釋,最終結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)。
五、儲(chǔ)存與使用注意事項(xiàng)
1、標(biāo)準(zhǔn)品需嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求儲(chǔ)存,一般需避光、低溫存放,避免高溫高濕,使用后立即蓋緊瓶蓋,減少揮發(fā)和污染。
2、多數(shù)商品化生化試劑盒自帶的標(biāo)準(zhǔn)曲線已經(jīng)過(guò)溯源驗(yàn)證,可直接使用,不建議重新繪制,避免損耗試劑導(dǎo)致樣本檢測(cè)量不足。
3、對(duì)于重要檢測(cè),建議在繪制標(biāo)曲后加入質(zhì)控品驗(yàn)證,確認(rèn)準(zhǔn)確度和精密度符合要求后,再進(jìn)行樣本檢測(cè)。