血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)精密，主要由內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞構(gòu)成。不同來(lái)源的血管細(xì)胞在心血管疾病、血管生物學(xué)、藥物篩選及組織工程等研究中承擔(dān)著截然不同卻又彼此關(guān)聯(lián)的功能。然而，不少科研人員在實(shí)操中常因不同細(xì)胞類(lèi)型的分離細(xì)節(jié)差異而困擾。

本期細(xì)胞學(xué)堂梳理了血管類(lèi)原代細(xì)胞分離的共性流程與關(guān)鍵差異點(diǎn)，幫助建立完整的技術(shù)思路。

一、血管類(lèi)原代細(xì)胞的研究應(yīng)用

血管內(nèi)皮細(xì)胞

血管內(nèi)皮細(xì)胞位于血管內(nèi)腔表面，形成一層連續(xù)的單細(xì)胞屏障。它們不僅在物質(zhì)交換和血管通透性調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用，還參與血管張力調(diào)節(jié)、凝血過(guò)程、炎癥反應(yīng)及血管新生等過(guò)程。因此，內(nèi)皮細(xì)胞廣泛用于血栓形成、動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥反應(yīng)、腫瘤血管生成等疾病機(jī)制的研究。

血管平滑肌細(xì)胞

血管平滑肌細(xì)胞位于內(nèi)皮細(xì)胞下方的中層，主要通過(guò)收縮與舒張調(diào)節(jié)血管管腔直徑，進(jìn)而調(diào)控血壓和血流分布。平滑肌細(xì)胞在高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、動(dòng)脈瘤、支氣管哮喘、肺動(dòng)脈高壓等疾病研究中廣泛應(yīng)用。

二、血管組織原代細(xì)胞分離的基本流程

盡管血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞在組織分布和功能特性上存在差異，但二者的整體分離流程高度一致，主要包括以下步驟：

組織獲取與預(yù)處理：

從目標(biāo)組織（如肺大動(dòng)脈、胸主動(dòng)脈）剝離血管段，小心去除外膜脂肪和結(jié)締組織，清洗去除血液和雜質(zhì)后剪碎備用。

酶消化：

采用膠原酶、胰蛋白酶等消化酶，破壞細(xì)胞外基質(zhì)，使組織結(jié)構(gòu)松散并釋放細(xì)胞。酶的種類(lèi)、濃度及消化時(shí)間需要根據(jù)目標(biāo)細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化。

濾網(wǎng)過(guò)濾（可選）：

通過(guò)細(xì)胞濾網(wǎng)去除未消化的組織碎片，獲得相對(duì)均一的細(xì)胞懸液。注：平滑肌細(xì)胞分離通?？墒÷源瞬襟E。

細(xì)胞接種與培養(yǎng)：

將細(xì)胞懸液接種于合適的完全培養(yǎng)基中，完全培養(yǎng)基提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分，并維持目標(biāo)細(xì)胞的優(yōu)先生長(zhǎng)。

三、不同血管來(lái)源細(xì)胞分離關(guān)鍵差異

01、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇

合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是獲得高質(zhì)量原代細(xì)胞的前提。動(dòng)物的日齡和數(shù)量直接決定了細(xì)胞的得量、增殖能力和純度。推薦使用Wistar, SD等品系大鼠。

注：1Test是指獲得1瓶T25培養(yǎng)瓶細(xì)胞（細(xì)胞數(shù)量>1×106?cells）所需的動(dòng)物數(shù)。實(shí)際數(shù)量可能因血管長(zhǎng)度及取材損耗有所波動(dòng)。

02、組織辨識(shí)與精細(xì)分離

準(zhǔn)確辨識(shí)目標(biāo)血管是分離成功的關(guān)鍵。肺大動(dòng)脈與大隱靜脈取材難度相對(duì)較高，建議在正式實(shí)驗(yàn)前按標(biāo)準(zhǔn)操作流程練習(xí)取材。

03、組織處理策略

組織處理直接影響到最終獲得細(xì)胞的純度和狀態(tài)。取材后應(yīng)在清洗液中輕柔、徹底地剝離血管外膜的脂肪和結(jié)締組織，以減少雜細(xì)胞污染。內(nèi)皮細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞的處理策略存在本質(zhì)差異：

• 內(nèi)皮細(xì)胞：血管的內(nèi)膜面很薄，肉眼幾乎不可見(jiàn)。需縱向剖開(kāi)血管并展開(kāi)內(nèi)膜面，剪成約1 cm的小段，再進(jìn)行酶消化以釋放內(nèi)皮細(xì)胞。需要注意的是，若組織剪得過(guò)碎易增加平滑肌細(xì)胞污染，影響細(xì)胞純度。

• 平滑肌細(xì)胞：需先反復(fù)輕刮內(nèi)膜面數(shù)十次，以清除內(nèi)皮細(xì)胞層。隨后刮取平滑肌層并去除外膜，即可得到純凈的平滑肌組織。將該組織剪成約5 mm2的小塊充分消化，以促進(jìn)細(xì)胞釋放并提高平滑肌細(xì)胞純度。

04、過(guò)濾步驟的差異

不同細(xì)胞類(lèi)型在是否需要過(guò)濾方面也存在差異。

• 內(nèi)皮細(xì)胞：通常需要過(guò)濾（推薦100 μm濾網(wǎng)）

消化后細(xì)胞常以細(xì)胞片或小團(tuán)塊形式脫落，且懸液中可能含有未消化的血管組織碎片，過(guò)濾可提高細(xì)胞懸液均一性和細(xì)胞純度。

• 平滑肌細(xì)胞：通常不需要過(guò)濾

平滑肌組織在消化前已經(jīng)被機(jī)械分離并剪碎，消化后細(xì)胞多以單細(xì)胞或小團(tuán)塊形式存在，大塊組織殘留較少。如果再次過(guò)濾，反而可能造成細(xì)胞損失，降低總體得率。

05、基質(zhì)包被需要

• 內(nèi)皮細(xì)胞：貼壁能力相對(duì)較弱，通常需要使用鋪板工作液或基質(zhì)蛋白（如膠原、纖連蛋白）進(jìn)行包被，以促進(jìn)細(xì)胞附著。

• 平滑肌細(xì)胞：貼壁能力較強(qiáng)，多數(shù)情況下無(wú)需特殊包被即可正常貼壁生長(zhǎng)。

從細(xì)胞特性解析到實(shí)操細(xì)節(jié)把控，掌握上述差異點(diǎn)是成功分離高質(zhì)量血管原代細(xì)胞的關(guān)鍵。希望本期梳理能助力科研人員順利開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，提升研究效率。

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