關鍵詞:APOA1、載脂蛋白A1、重組蛋白、高密度脂蛋白、膽固醇逆向轉運、心血管疾病、N-His、大腸桿菌表達
一、APOA1:分子結構與生物學功能
APOA1(ApolipoproteinA-I)是由 APOA1 基因編碼的載脂蛋白,是血漿高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白組分。APOA1通過參與膽固醇逆向轉運(ReverseCholesterolTransport,RCT),促進膽固醇從外周組織流出,并作為卵磷脂膽固醇?;D移酶(LCAT)的關鍵輔因子,將膽固醇酯化后轉運至肝臟進行代謝和排泄。本產(chǎn)品為重組人APOA1蛋白(Arg19-Gln267),采用大腸桿菌表達系統(tǒng),N端攜帶His標簽,經(jīng)純化后獲得高純度蛋白。
APOA1的核心生理功能包括:
膽固醇逆向轉運:APOA1是HDL的主要載脂蛋白,通過ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)介導,促進巨噬細胞等外周細胞多余膽固醇的流出,是膽固醇逆向轉運的啟動步驟;
LCAT輔因子:APOA1作為LCAT的輔因子,促進膽固醇酯化,推動新生HDL向成熟HDL轉化,是HDL成熟的關鍵環(huán)節(jié);
抗動脈粥樣硬化:APOA1通過促進膽固醇逆向轉運、抗氧化、抗炎和抗凋亡等多重機制,保護血管內皮細胞,減少動脈粥樣硬化風險;
心血管疾病生物標志物:APOA1是心血管疾病的重要預測生物標志物,其水平降低與HDL缺乏癥、Tangier病等疾病密切相關;
炎癥與免疫調控:APOA1可抑制活化巨噬細胞釋放IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥因子,在急性炎癥反應中對組織和器官起保護作用。
表達與分布:APOA1主要由肝臟和小腸合成與分泌,是血漿中含量最高的載脂蛋白。重組APOA1蛋白可作為免疫原、WB/ELISA標準品用于基礎與轉化研究。
二、APOA1重組蛋白的科研核心價值
高質量重組APOA1蛋白在多領域研究中具有不可替代的應用價值:
脂質代謝與心血管疾病研究:用于研究膽固醇逆向轉運的分子機制、HDL代謝調控及抗動脈粥樣硬化功能;
炎癥與免疫學研究:分析APOA1對巨噬細胞炎癥因子分泌的調控作用,探索其在炎癥反應中的保護機制;
LCAT活性研究:作為LCAT的輔因子,用于體外LCAT活性檢測方法的建立和酶活性評價;
免疫檢測標準品:可作為WesternBlot、ELISA的陽性對照或定量標準品,建立檢測方法;
抗體篩選與免疫原:用于制備抗人APOA1單克隆/多克隆抗體,或作為免疫原進行動物免疫;
藥物開發(fā)與活性測試:在細胞水平測試候選化合物對APOA1表達或膽固醇外流功能的調控作用。
三、蛋白純度與質檢驗證(SDS-PAGE)
本產(chǎn)品經(jīng)SDS-PAGE驗證,純度>90%,滿足大多數(shù)免疫檢測及細胞生物學實驗要求。代表性SDS-PAGE結果顯示:在約31.27kDa位置出現(xiàn)單一主條帶,與預測分子量一致,無明顯降解或聚集條帶。
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圖注:Lane1:分子量標記;Lane2:還原條件下RecombinantHumanAPOA1Protein,N-His,可見清晰單一條帶,純度>90%。
四、高品質RecombinantHumanAPOA1Protein,N-His核心參數(shù)與技術優(yōu)勢
核心產(chǎn)品參數(shù)
ELISA、免疫原(Immunogen)、SDS-PAGE、WB、生物活性測試(進行中)
凍干前溶液:PBS(pH7.4),1mMEDTA,4%海藻糖,1%甘露醇
頻繁使用:2-8℃;長期保存:-20至-80℃,自收貨之日起12個月。避免反復凍融,使用手動除霜冰箱
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技術優(yōu)勢
大腸桿菌表達系統(tǒng):高產(chǎn)量、成本低、批間穩(wěn)定性高,適合大規(guī)模制備;
N-His標簽設計:His標簽便于通過親和層析進行高純度純化,同時兼容Ni-NTA親和檢測體系,便于蛋白的檢測與追蹤;
高純度(>90%):經(jīng)SDS-PAGE驗證,非特異性背景低,滿足ELISA、WB及免疫原制備等應用要求;
多應用場景:已驗證可用于ELISA、免疫原、SDS-PAGE、WB,生物活性測試進行中;
優(yōu)化凍干配方:含海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑,提高蛋白長期穩(wěn)定性;PBS體系兼容多數(shù)下游實驗。
FAQ(高頻問題)
1.該重組蛋白的活性如何?是否適用于細胞培養(yǎng)?
目前生物活性測試正在進行中。如需最新活性數(shù)據(jù),可聯(lián)系技術支持獲取。
2.如何復溶和保存?
打開管蓋前短暫離心,加入無菌水復溶配制儲備液。復溶后可分裝凍存于-20℃或-80℃,避免反復凍融。
3.N端的His標簽會影響APOA1的功能嗎?
His標簽位于蛋白N端,通常不影響APOA1與脂質結合及LCAT輔因子活性。若實驗對標簽敏感,可咨詢技術支持。
4.可以用于WesternBlot的陽性對照嗎?
可以。本品已驗證適用于WB,使用抗APOA1抗體或抗His標簽抗體均可檢測。
5.該蛋白是否適合制備抗體?
可以。本品純度>90%,可作為免疫原免疫動物(兔、小鼠等)制備多克隆或單克隆抗體。
6.本產(chǎn)品與天然APOA1的序列差異?
本產(chǎn)品為重組人APOA1片段(Arg19-Gln267),N端添加了His標簽用于純化和檢測。
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注:如需內毒素檢測服務、活性測試方案或大批量定制需求,請咨詢技術支持。
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