結(jié)合此前介紹的整合素αV(CD51)抗體的基礎(chǔ)產(chǎn)品特性背景,不同實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景下的正確使用方法如下:
?WB實(shí)驗(yàn)?
推薦稀釋比例1:500-1:10000,提取蛋白時(shí)需加入蛋白酶抑制劑,4℃孵育一抗過(guò)夜,后續(xù)洗膜后結(jié)合二抗顯色,檢測(cè)蛋白表達(dá)水平。
?IHC/IF實(shí)驗(yàn)?
推薦稀釋比例1:100-1:500,石蠟切片需提前做抗原修復(fù),用5%BSA封閉降低背景,細(xì)胞膜表面抗原檢測(cè)無(wú)需過(guò)度通透。
?IP實(shí)驗(yàn)?
推薦稀釋比例1:20-1:50,搭配NP-40溫和裂解液,使用蛋白A/G磁珠捕獲抗體-抗原復(fù)合物,后續(xù)可通過(guò)WB驗(yàn)證富集效果。
?ELISA實(shí)驗(yàn)?
推薦稀釋比例1:500-10000,樣本需提前去除雜質(zhì),按雙抗體夾心法流程操作,450nm波長(zhǎng)讀取OD值計(jì)算抗原濃度。
?流式細(xì)胞術(shù)?
推薦用量1μg/test,緩沖液中避免添加NaN?,防止影響細(xì)胞活性,完成染色后及時(shí)上機(jī)檢測(cè)。
使用全程需避免反復(fù)凍融,每批新抗體需用陽(yáng)性對(duì)照驗(yàn)證活性,僅可用于科研場(chǎng)景。