穩(wěn)定同位素標記試劑是代謝通路研究的核心實驗耗材,琥珀酰丙酮 - 13C5 依托全碳同位素標記結(jié)構(gòu),成為小分子有機酸代謝分析常用標記底物。該試劑碳骨架全部由碳 13 同位素構(gòu)成,分子結(jié)構(gòu)與天然琥珀酰丙酮保持一致,同位素取代位點均勻分布,不會改變原有分子理化特性,適配多種液相質(zhì)譜聯(lián)用檢測體系。
科研場景中,該標記物多用于微生物代謝流示蹤、細胞基礎(chǔ)代謝通路追蹤兩類主流實驗。微生物培養(yǎng)體系內(nèi),可添加至培養(yǎng)基作為碳源底物,追蹤微生物體內(nèi)酮體合成、三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物轉(zhuǎn)化全過程;體外細胞培養(yǎng)實驗中,用于觀測胞內(nèi)有機酸物質(zhì)轉(zhuǎn)運、酶促催化反應(yīng)底物消耗規(guī)律,區(qū)分內(nèi)源代謝產(chǎn)物與外源添加標記底物信號。
選擇琥珀酰丙酮 - 13C5 開展實驗,核心優(yōu)勢體現(xiàn)在同位素標記完整性與質(zhì)譜辨識度兩方面。普通未標記琥珀酰丙酮無法區(qū)分細胞自身合成代謝物與外源引入底物,碳 13 標記后質(zhì)譜檢測可形成專屬質(zhì)量偏移峰,實現(xiàn)代謝物來源精準溯源。完整五碳同位素標記結(jié)構(gòu),相比單碳、雙碳標記試劑,能完整追蹤整條代謝分支轉(zhuǎn)化路徑,減少檢測信號缺失帶來的實驗誤差。
該試劑可解決多項代謝研究常見難題。傳統(tǒng)非標記底物實驗,內(nèi)源與外源代謝信號重疊,難以定量物質(zhì)轉(zhuǎn)化效率;低標記位點同位素試劑,代謝分支多點轉(zhuǎn)化時信號覆蓋不全,無法完整繪制代謝網(wǎng)絡(luò)圖。琥珀酰丙酮 - 13C5 憑借全碳標記特性,拆分重疊質(zhì)譜信號,完整捕捉多步連續(xù)酶促反應(yīng)中間產(chǎn)物,降低代謝流定量分析干擾。同時分子水溶性適中,適配水相細胞培養(yǎng)液、微生物液體培養(yǎng)基,無需額外助溶劑,避免助劑干擾胞內(nèi)代謝穩(wěn)態(tài)。
試劑適配高分辨液質(zhì)、氣相色譜質(zhì)譜等主流檢測設(shè)備,操作流程與普通琥珀酰丙酮完全統(tǒng)一,無需額外優(yōu)化實驗方法,縮短實驗方案調(diào)試周期。適用于植物次生代謝、原核微生物代謝、哺乳動物細胞基礎(chǔ)代謝等基礎(chǔ)方向研究,僅作為體外實驗室示蹤底物使用。
科普聲明:本文僅針對琥珀酰丙酮 - 13C5 科研實驗應(yīng)用方向開展基礎(chǔ)試劑科普,內(nèi)容僅作實驗室方案參考,不涉及其他領(lǐng)域用途說明。
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