吲哚菁綠 - 乙酰輔酶 a 是乙酰輔酶 A 分子共價(jià)偶聯(lián) ICG 近紅外熒光染料的代謝示蹤探針，完整保留乙酰輔酶 A 作為乙?；w的生物活性，ICG 近紅外光學(xué)特性實(shí)現(xiàn)分子胞內(nèi)動(dòng)態(tài)可視化，用于乙?；揎?、線粒體能量代謝通路基礎(chǔ)研究。
該試劑首要應(yīng)用為細(xì)胞乙?；揎椀孜锸聚?。探針進(jìn)入細(xì)胞后作為內(nèi)源乙酰輔酶 A 替代底物，參與組蛋白、代謝酶蛋白乙酰化修飾反應(yīng)，借助 ICG 近紅外熒光信號(hào)定位乙酰化修飾發(fā)生的細(xì)胞核、線粒體位點(diǎn)，對(duì)比氧化應(yīng)激、營(yíng)養(yǎng)匱乏條件下胞內(nèi)乙酰化反應(yīng)強(qiáng)度變化。
線粒體脂肪酸合成代謝追蹤為核心實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。乙酰輔酶 A 是脂肪酸從頭合成起始底物，ICG 熒光標(biāo)記后可完整追蹤分子從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體，參與脂肪酸鏈延伸全過(guò)程，量化不同碳源供給下乙酰輔酶 A 代謝分流比例，解析脂合成與能量代謝通路交互調(diào)控規(guī)律。
體外乙酰轉(zhuǎn)移酶活性檢測(cè)適配該探針體系。純化乙酰轉(zhuǎn)移酶與 ICG-Acetyl coenzyme A、底物多肽共孵育，近紅外熒光信號(hào)定量酶促反應(yīng)產(chǎn)物生成量，快速篩選調(diào)控乙酰轉(zhuǎn)移酶活性的小分子化合物，建立高通量酶活篩選實(shí)驗(yàn)體系。
選用吲哚菁綠 - 乙酰輔酶 a 的關(guān)鍵特性是 ICG 修飾位點(diǎn)遠(yuǎn)離乙酰輔酶 A 活性硫酯鍵，不會(huì)阻斷乙?；鶊F(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，探針生理代謝行為與天然乙酰輔酶 A 高度一致；近紅外熒光穿透細(xì)胞組織能力強(qiáng)，多層細(xì)胞共培養(yǎng)樣本成像清晰，背景干擾微弱。
直接檢測(cè)乙酰輔酶 A 僅能通過(guò)質(zhì)譜終點(diǎn)定量，無(wú)法觀測(cè)分子在細(xì)胞器間轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)態(tài)，普通可見光標(biāo)記輔酶 A 探針易受細(xì)胞自發(fā)熒光掩蓋，ICG-Acetyl coenzyme A 將代謝底物功能與近紅外示蹤結(jié)合，實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞乙?；x實(shí)時(shí)可視化觀測(cè)。
本文僅科普吲哚菁綠 - 乙酰輔酶 a 在乙?；x基礎(chǔ)科研中的應(yīng)用方向，相關(guān)實(shí)驗(yàn)方案僅適用于實(shí)驗(yàn)室代謝酶、表觀修飾機(jī)制類基礎(chǔ)研究參考。
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