黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒測定意義:
黃嘌呤氧化酶(XOD,EC1.17.3.2)屬需氧脫氫酶類,是活性氧主要來源之一,也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的肝臟等組織中,當肝功能受損時XOD大量釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。
黃嘌呤氧化酶(XOD)活性檢測試劑盒測定原理:
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。
黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選試劑盒(WST-8法)測定意義:
黃嘌呤氧化酶(XO or XOD)是體內(nèi)核酸代謝中的一種重要酶,可以催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤,并能進一步催化黃嘌呤氧化為尿酸,同時產(chǎn)生過氧化氫以及超氧化物陰離子的一系列氧化反應(yīng),在包括人類在內(nèi)的一些物種中的嘌呤分解代謝中起著重要作用。在人類及其它靈長類動物中,XO通常存在于血清、肺、肝臟和腸黏膜中。在嚙齒類動物中,XO在大部分組織中均有表達。血液中XO的活性通常都很低。當感染甲型流感時,血清及肺部的XO活性會增加。當肝功能受損時,XO會大量釋放到血液中,因此檢測血液中XO水平被作為一個評估嚴重肝損傷(例如黃疸)的靈敏指標。XO也可能與痛風的發(fā)病機理相關(guān),黃嘌呤氧化酶是尿酸形成的代謝途徑,因此使用黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌呤醇用于治療痛風。此外,研究顯示抑制XO活性可緩解心血管疾病及慢性阻塞性肺疾病。
黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選試劑盒(WST-8法)測定原理:
黃嘌呤在XO催化作用下產(chǎn)生的超氧化物陰離子(O2·–),隨后與WST類指示劑(Indicator)反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲臜染料(Formazan dye)。甲臜染料在450nm左右有最大吸收峰,通過測定450nm處的吸光度就可以非常靈敏地檢測黃嘌呤氧化酶活性。如果在反應(yīng)中加入黃嘌呤氧化酶抑制劑(Inhibitor),甲臜染料的生成就會被抑制,甲臜的生成量與抑制劑的抑制效果成反比,這樣就可以檢測出抑制劑的抑制效果。
一招核心辨別:看實驗核心目的
1. 測酶活性→選黃嘌呤氧化酶活性檢測:核心是“測樣本本身”,檢測生物樣本(血清、組織液等)中現(xiàn)有XOD酶的活性高低,用于臨床疾病診斷、生理狀態(tài)評估,檢測靶點是酶的本底活性,檢測波長290nm。
2. 篩藥物/抑制劑→選黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選檢測:核心是“測物質(zhì)效果”,依托XOD酶體系,驗證待測化合物是否能抑制酶活性、抑制效果強弱,用于藥物研發(fā)、活性物質(zhì)篩選,檢測靶點是抑制劑的作用效率,檢測波長450nm,靈敏度更高。
3. 核心應(yīng)用場景
該檢測主打靶向藥物研發(fā)、活性化合物篩選、抑制劑效能評價,極少用于臨床樣本檢測。核心應(yīng)用于抗痛風、降尿酸候選藥物的體外初篩與復篩,甄別天然產(chǎn)物、合成化合物是否具備XOD抑制活性;用于功能性食品、天然提取物的抗氧化、降尿酸活性評價;可開展抑制劑劑量效應(yīng)驗證,測試不同濃度待測藥物的抑制率,計算IC50值,為后續(xù)細胞實驗、動物體內(nèi)藥效實驗提供數(shù)據(jù)支撐;同時適用于機制驗證實驗,對比新舊藥物、陽性藥(別嘌呤醇)的抑制效能差異。
兩種檢測全方位核心差異對照表
通用注意事項
簡單總結(jié):測樣本、做病理、造模型用活性檢測;篩藥、評活性、算IC50用抑制劑篩選檢測。
對比維度 | 黃嘌呤氧化酶活性檢測 | 黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選檢測 | XOD催化黃嘌呤生成尿酸,檢測尿酸290nm紫外特征吸收
XOD催化產(chǎn)超氧陰離子,與WST顯色生成甲臜染料,檢測450nm吸光度變化
臨床肝損傷診斷、動物氧化應(yīng)激模型驗證、體內(nèi)酶活機制研究
抗痛風降尿酸藥物篩選、天然產(chǎn)物活性評價、抑制劑IC50測定、藥效對比驗證
規(guī)避290nm紫外干擾,杜絕溶血、脂血樣本,精準控制反應(yīng)終點
統(tǒng)一加樣條件、設(shè)置樣品本底對照、即時檢測顯色體系、增設(shè)別嘌呤醇陽性對照
XOD活性檢測專屬注意事項
本檢測為290nm紫外吸收檢測,體系不得含有290nm紫外吸收雜質(zhì),避免基線偏高、結(jié)果虛高。需精準控制孵育時長,防止反應(yīng)不完全或非特異性氧化干擾定量結(jié)果;嚴格剔除溶血、脂血臨床樣本,避免血紅蛋白、脂質(zhì)干擾紫外吸光度,保障數(shù)據(jù)真實可靠。
XOD抑制劑篩選檢測專屬注意事項
本檢測為高靈敏度WST顯色體系,需統(tǒng)一各組加樣量、加樣順序與反應(yīng)條件,保證單一變量。自帶顏色、氧化還原性的待測樣品需設(shè)置本底對照,規(guī)避光學干擾。超氧陰離子與甲臜染料穩(wěn)定性弱,顯色后需立即上機檢測,避免信號衰減產(chǎn)生誤差;需增設(shè)別嘌呤醇陽性對照,校準實驗體系,驗證結(jié)果有效性。
在實驗檢測、藥物篩選及臨床檢測場景中,多數(shù)人極易混淆黃嘌呤氧化酶活性檢測與黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選檢測兩種實驗。二者雖圍繞同一靶點黃嘌呤氧化酶(XOD/XO)展開,但核心目的、檢測原理、應(yīng)用場景完全不同。
相關(guān)試劑盒:
黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(分光光度法)
OX003-50T/48S
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黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(分光光度法)
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480
黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(微量法)
OX004-50T/48S
260
黃嘌呤氧化酶(XOD)檢測試劑盒(微量法)
OX004-100T/96S
480
黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選試劑盒(WST-8法)分光法
OX031-50T
480
黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選試劑盒(WST-8法)微量法
OX032-100T
680
文章僅供參考,具體實驗需求請查閱文獻或參考相關(guān)資料,本公司產(chǎn)品僅供科研使用?。?/span>
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