小伙伴們在了解PE染料時，都有這樣的疑惑：規(guī)格是1mg，應該是固體，為啥染料呈現(xiàn)的確是液體形式呢？這個就在于它特殊的儲存方式-----保存在硫酸銨溶液里。那為什么要儲存在硫酸銨溶液里呢，那使用時又要怎樣去除硫酸銨溶液呢？不用復雜設備，用一根PD-10脫鹽柱，就能輕松搞定純化脫鹽，看完這篇，“小白”也能一次做成功～
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一、PD-10脫鹽柱純化PE的過程是怎樣的？
全程重力自流操作，不用離心、不用加壓，全程避光操作，保住PE熒光活性，步驟拆解清晰，照著做不踩坑～
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前期準備
- 樣品：硫酸銨懸浮的PE染料（用之前輕輕顛倒混勻，別劇烈搖晃，避免傷了蛋白）
- 耗材：PD-10葡聚糖凝膠脫鹽柱、無菌無胺PBS緩沖液、干凈離心管
- 環(huán)境：全程避光、盡量低溫操作，別讓陽光直射，不然PE熒光就廢了
步驟1：柱子平衡（最關鍵，少一步都不行）
1. 撕掉PD-10柱子上下的密封封口，垂直固定在支架上，一定要保持豎直，別傾斜
2. 讓柱內(nèi)原本的保存液自然流干，別用力擠壓、吹打凝膠柱，容易把凝膠搞壞
3. 加5mL無菌無胺PBS緩沖液，等它完全流干，重復3次，把柱子環(huán)境徹底穩(wěn)住
步驟2：上樣加載
1. 吸取混勻后的PE原液，體積控制在1.0-1.5mL（這是PD-10的最大上樣量，千萬別超標，不然脫鹽不徹底）
2. 把PE樣品慢慢加到凝膠柱中央，等樣品完全滲進凝膠里，液面和凝膠表面齊平就好
步驟3：洗去鹽分（廢液直接棄，別心疼）
加2mL PBS緩沖液洗脫，這段流出來的液體全是高濃度硫酸銨廢液，直接倒掉，絕對不能收集，這樣才能把殘留的鹽分徹底沖干凈。
步驟4：收集純化好的PE（重點來了?。?/span>
1. 換一個干凈的離心管，準備接成品
2. 分次加PBS緩沖液，每次加1mL，一共收集3mL左右的洗脫液
3. 收集到的淡紅色清亮液體，就是徹底脫鹽、沒有硫酸銨殘留的純PE溶液啦
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二、純化過程中需要注意些什么？
- 全程嚴格避光：PE熒光怕光，見光容易淬滅失效，操作全程用錫紙遮擋，遠離強光、燈光直射
- 嚴禁用含胺緩沖液：絕對不能用Tris、HEPES含氨基緩沖液，會直接阻斷后續(xù)PE活化反應，只能用純PBS
- 禁止加壓擠壓：全程重力自流，不要捅凝膠、不要用力吹吸，避免凝膠壓實，導致脫鹽不徹底
-?不要過量上樣：PE樣品控制在1.5mL以內(nèi)，過量會導致鹽分除不干凈，實驗失敗
- 純化后立即使用：脫鹽后的PE沒有硫酸銨保鮮，穩(wěn)定性變差，建議4℃短期保存，24小時內(nèi)做完活化偶聯(lián)
- 觀察液體狀態(tài)：純化后的PE清亮不渾濁、無白色鹽粒、無沉淀，才算純化合格
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看到這里，相信小伙伴們再也不用疑惑“1mg PE固體為啥是液體”啦！其實都是硫酸銨保鮮的小技巧，而去除硫酸銨也一點不復雜，一根PD-10脫鹽柱，跟著步驟一步步來，避光、控量、棄廢液，十幾分鐘就能得到純凈PE，哪怕是實驗小白，也能輕松拿捏，再也不用為脫鹽翻車發(fā)愁～