酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)是一種基于免疫學(xué)原理,利用酶標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行定量或定性檢測(cè)的常用技術(shù)。待測(cè)樣品種類廣泛,包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液、組織勻漿等。
ELISA的基本原理是將抗原或抗體固定在固相載體(通常是96孔板)表面,然后利用酶標(biāo)記的抗體(或抗原)與待測(cè)樣品中的目標(biāo)抗原(或抗體)進(jìn)行特異性結(jié)合。結(jié)合后的酶催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),通過酶標(biāo)儀測(cè)量反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度(即光密度,OD值),即可定量或定性分析待測(cè)樣品中目標(biāo)物質(zhì)的含量。
ELISA的類型多樣,包括直接法、間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法等。不同類型的ELISA在操作步驟和抗體/抗原的結(jié)合方式上有所不同,需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮痛郎y(cè)物質(zhì)選擇合適的ELISA方法。下面晶抗為大家介紹三種常用方法:
間接法。直接法是檢測(cè)抗體常用方法,例如檢測(cè)人體內(nèi)是否存在針對(duì)特定病原體的抗體。選擇間接法優(yōu)勢(shì)在于它可以加強(qiáng)信號(hào),靈敏度高;一種酶標(biāo)二抗可以用于檢測(cè)多種不同的一抗,節(jié)省成本。缺點(diǎn)就是交叉反應(yīng)的幾率較高,需要選擇合適的封閉劑和洗滌條件以降低背景信號(hào)。
夾心法。夾心法是檢測(cè)大分子抗原常用的方法(例如細(xì)胞因子、激素),優(yōu)勢(shì)是高靈敏,特異性強(qiáng),抗原無需純化即可檢測(cè)。缺點(diǎn)是需要兩種針對(duì)不同表位的抗體;抗原必須具有至少兩個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。
競(jìng)爭(zhēng)法。競(jìng)爭(zhēng)法是檢測(cè)小分子半抗原(藥物、激素)的方法。優(yōu)勢(shì)可以檢測(cè)小分子物質(zhì)和不純的樣本;數(shù)據(jù)重現(xiàn)性好。缺勢(shì)是整體的靈敏度和特異性相對(duì)較低。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,通過酶標(biāo)儀測(cè)出對(duì)應(yīng)的OD值,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本的濃度。
上述是ELISA檢測(cè)方法介紹,通過本文想必你對(duì)elisa是什么檢測(cè)方法有所了解。ELISA是酶聯(lián)免疫法,在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和食品環(huán)境等領(lǐng)域使用比較廣泛。希望您對(duì)了解ELISA法,助力于自己科研。