試劑盒組成:
備注:
1.?(96T/48T)打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。
2.?標準品濃度依次為:80、40、20、10、5、0 ng/mL。
3.?經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
檢測前準備工作:
1.?請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
2.?從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象;放置室溫,輕搖均勻,待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液??蓪?/span>20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4℃
3.?20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。。
實驗原理:
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。