試劑的準備
?20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.??手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.??自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.???從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.???設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.???樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.???除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.???棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.???每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.???每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
試劑盒性能
1.?準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2.?靈敏度：最低檢測濃度小于1.0 pmol/L。
3.?檢測范圍：1.0 - 200 pmol/L。
4.?特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。
5.?重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
6.?貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
7.?有效期：6個月