馬錢子探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）
Semen strychni(Strychnos nux-vomica) Probe qPCR Kit (without internal control)
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馬錢子探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）產(chǎn)品及特點：
利用實時熒光定量 PCR 技術(shù)，針對馬錢子基因組 DNA 中的特定片段設(shè)計特異性引物和熒光探針。在 PCR 反應(yīng)體系中，如果樣本中存在馬錢子的 DNA，引物會特異性地結(jié)合到馬錢子 DNA 的目標區(qū)域，在 Taq 酶的作用下進行 DNA 擴增。同時，熒光探針與擴增產(chǎn)物中的目標序列發(fā)生特異性雜交，Taq 酶延伸時會切割熒光探針，使熒光報告基團與淬滅基團分離，從而釋放出熒光信號。通過熒光定量 PCR 儀監(jiān)測熒光信號的變化，就可以對馬錢子核酸進行定性或定量分析，進而判斷樣品中是否含有馬錢子成分。它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到 100 拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)馬錢子DNA 高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他的 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量時其線性范圍不少于 5 個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分：
運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
自備試劑 樣品 DNA。
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馬錢子探針法PCR鑒定試劑盒（不含內(nèi)參）使用方法：
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品，最好設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 上步所得 4 號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的起始體積一樣，以此作為
PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個
用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（直接用第 6 步第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
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各 7μL（1 號樣
到 1 號管，2 號
樣到 2 號管…）
11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數(shù)進行 PCR：
PCR 反應(yīng)
（45 個循環(huán)）
1 min（采集 FAM 通道的熒
光信號，3`BHQ1 為淬滅基
團）
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須沒有數(shù)值，或者 Ct 值等于或者大于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct 值應(yīng)該小于 40。對待測樣品，如果其 Ct 小于 40 則為陽性。如果沒有 Ct 值，或大于或等于 40 則為陰性。