NEK7（NIMA相關(guān)激酶7）是一個(gè)極具潛力的、用于治療炎癥性疾病和癌癥的藥物靶點(diǎn)。它的核心價(jià)值在于，它同時(shí)參與了細(xì)胞周期的調(diào)控和炎癥反應(yīng)，這使其成為一個(gè)多功能的治療靶點(diǎn).
一、作用機(jī)制
NEK7在人體內(nèi)主要有兩大功能：
細(xì)胞分裂：作為一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，NEK7在細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中對(duì)紡錘體的形成和胞質(zhì)分裂至關(guān)重要。
炎癥激活：這是NEK7作為藥物靶點(diǎn)的核心機(jī)制。它是關(guān)鍵炎癥復(fù)合體——NLRP3炎癥小體激活所必需的“輔助因子”。當(dāng)NEK7與NLRP3結(jié)合后，會(huì)促使炎癥小體組裝，進(jìn)而產(chǎn)生IL-1β和IL-18等炎癥因子，并誘導(dǎo)細(xì)胞焦亡。
圖：NEK7-NLRP3的相互作用和NLRP3炎癥小體的組裝與活化
From：Chen L, Liu Y, Yue S, et al. P2X7R Modulates NEK7-NLRP3 Interaction to Exacerbate Experimental Autoimmune Prostatitis via GSDMD-mediated Prostate Epithelial Cell Pyroptosis. Int J Biol Sci. 2024;20(9):3393-3411. Published 2024 Jun 11. doi:10.7150/ijbs.94704
NEK7的異常激活與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，主要包括：
炎癥性疾?。和ㄟ^(guò)激活NLRP3炎癥小體，NEK7與2型糖尿病、終末期腎病相關(guān)的心血管疾病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和敗血癥引起的心肌病等密切相關(guān)。
惡性腫瘤：NEK7表達(dá)失調(diào)與多種癌癥的進(jìn)展有關(guān)，如肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌和胰腺癌，使其成為抗癌藥物開發(fā)的潛在靶點(diǎn)。
目前，全球尚無(wú)靶向NEK7的藥物獲批上市，但已有多種策略處于活躍的臨床前研究階段：
一種曾進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)的EGFR-TKI抗癌藥，后被重新定位為NEK7抑制劑。它能與NEK7共價(jià)結(jié)合，阻斷其與NLRP3的相互作用，抑制NEK7的激酶活性（功能喪失）。
一種新型的分子膠降解劑。它能誘導(dǎo)NEK7蛋白被降解，完全清除NEK7蛋白（既有功能喪失，也阻斷骨架功能）。
Cycloartane-3.beta., 25-diol，Beta-Sitosterol
通過(guò)計(jì)算機(jī)虛擬篩選從植物中發(fā)現(xiàn)的多種天然化合物，顯示出與NEK7的強(qiáng)效結(jié)合能力，是開發(fā)新一代抑制劑的先導(dǎo)化合物。
二、NEK7研究相關(guān)檢測(cè)
（一）蛋白水平檢測(cè)
1、UniOne? TR-FRET Human NEK7/NLRP3 Binding檢測(cè)試劑盒
試劑盒采用均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)（TR-FRET），用于測(cè)定 NEK7 與 NLRP3 之間的相互作用。該方法可以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單快速的高通量鑒定抑制劑和抗體阻斷劑。
如圖所示，NEK7 與 NLRP3 之間的相互作用是通過(guò)使用 Eu 標(biāo)記的抗 Tag1 抗體（TR-FRET 供體）和 Accepter 標(biāo)記的抗 Tag2 抗體（TR-FRET受體）檢測(cè)的。由于NEK7 與 NLRP3結(jié)合介導(dǎo)供體抗體與受體抗體接近，供體抗體的激發(fā)會(huì)觸發(fā)向受體抗體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），使受體抗體特異性發(fā)射665nm波長(zhǎng)的信號(hào)。該特定信號(hào)與 IL6 與 IL6R 相互作用的程度成正比。該均相實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，無(wú)需洗滌步驟。
TR-FRET檢測(cè)技術(shù)特異性好，靈敏度高，重復(fù)性好，通量高，操作簡(jiǎn)單，手動(dòng)15min即可完成實(shí)驗(yàn)。
?圖：UniOne? TR-FRET Human NEK7/NLRP3 Binding檢測(cè)原理
2、UniOne? TR-FRET Human NEK7/CRBN PROTAC Binding檢測(cè)試劑盒
試劑盒基于均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)（TR-FRET），用于評(píng)估DDB1/CRBN復(fù)合物與NEK7之間的分子介導(dǎo)相互作用。該方法提供了一種高通量、簡(jiǎn)便快速的手段，可檢測(cè)能夠介導(dǎo)DDB1/CRBN復(fù)合物與NEK7相互作用的小分子。
如下圖所示，通過(guò)Eu標(biāo)記的抗Tag1抗體（TR-FRET供體）和Ac標(biāo)記的抗Tag2抗體（TR-FRET受體）檢測(cè)了DDB1/CRBN與NEK7之間的相互作用。由于分子粘附劑NK7-902 diTFA介導(dǎo)了DDB1/CRBN與NEK7之間的相互作用，因此供體抗體與受體抗體處于緊密鄰近狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)供體抗體時(shí)，會(huì)引發(fā)能量向受體抗體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），從而導(dǎo)致受體抗體在665 nm波長(zhǎng)處發(fā)出特異性信號(hào)。該特異性信號(hào)的強(qiáng)度與NK7-902 diTFA、DDB1/CRBN及NEK7之間相互作用的程度成正比。
該均相檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，無(wú)需洗滌步驟。
?圖：UniOne? TR-FRET Human NEK7/CRBN PROTAC Binding檢測(cè)原理
圖：UniOne? TR-FRET Human NEK7/CRBN PROTAC Binding示例數(shù)據(jù)
（二）細(xì)胞因子檢測(cè)（Biomarker檢測(cè)）
THUNDER TR-FRET細(xì)胞因子檢測(cè)
Human IL1β
THUNDER細(xì)胞因子檢測(cè)是基于雙抗體夾心法，標(biāo)記熒光供體和受體的IL1β 抗體Eu-Ab1和FR-Ab2，分別與細(xì)胞上清中IL1β 結(jié)合，產(chǎn)生能量共振轉(zhuǎn)移FRET（615nm），進(jìn)而產(chǎn)生665nm熒光信號(hào)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與IL1β 濃度成正比。
全程僅需2h，免洗，可高通量。檢測(cè)靈敏度高，上限寬。
Mouse IL1β
THUNDER細(xì)胞因子檢測(cè)是基于雙抗體夾心法，標(biāo)記熒光供體和受體的mouse IL1β 抗體Eu-Ab1和FR-Ab2，分別與樣品中IL1β 結(jié)合，產(chǎn)生能量共振轉(zhuǎn)移FRET（615nm），進(jìn)而產(chǎn)生665nm熒光信號(hào)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與IL1β 濃度成正比。全程僅需3h，免洗，可高通量。檢測(cè)靈敏度高，上限寬。
Human IL18
THUNDER細(xì)胞因子檢測(cè)是基于雙抗體夾心法，標(biāo)記熒光供體和受體的mouse IL1β 抗體Eu-Ab1和FR-Ab2，分別與樣品中IL1β 結(jié)合，產(chǎn)生能量共振轉(zhuǎn)移FRET（615nm），進(jìn)而產(chǎn)生665nm熒光信號(hào)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與IL1β 濃度成正比。全程僅需3h，免洗，可高通量。檢測(cè)靈敏度高，上限寬。
HICA細(xì)胞因子檢測(cè)
Human IL1β
試劑盒采用雙抗體夾心的均相發(fā)光法進(jìn)行hIL-1β濃度的檢測(cè)。均相化學(xué)發(fā)光是基于供受體微球近距離傳遞能量發(fā)光的均相免疫分析方法。
它采用受體微球交聯(lián)F結(jié)合物，供體微球交聯(lián)鏈霉親和素，F(xiàn)標(biāo)記hIL-1β抗體1和生物素標(biāo)記hIL-1β抗體2。兩種標(biāo)記抗體、受體微球與待測(cè)物混合孵育，形成雙抗體夾心免疫復(fù)合物，再與供體微球交聯(lián)形成發(fā)光復(fù)合物。當(dāng)兩種微球的間距小于200nm，經(jīng)激發(fā)光照射后，供體微球產(chǎn)生單線態(tài)氧并擴(kuò)散至受體微球，受體微球接受能量產(chǎn)生發(fā)射光。通過(guò)感光元件收集光信號(hào)，采用數(shù)學(xué)擬合計(jì)算待測(cè)物中hIL-1β的濃度。當(dāng)待測(cè)物中不含hIL-1β時(shí)，無(wú)免疫復(fù)合物的形成，兩種微球的間距大于200nm， 超出單線態(tài)氧的傳遞距離，則受體微球不產(chǎn)生發(fā)射光。
HICA檢測(cè)適用于普通及復(fù)雜樣本，如：細(xì)胞、血液、腦脊液等。每個(gè)檢測(cè)僅需2μl樣本量。HICA檢測(cè)范圍寬，靈敏度比肩MSD，操作簡(jiǎn)便，是高通量篩選的不二之選。
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