蛋白互作定量是解析細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)功能與通路激活的核心研究手段，傳統(tǒng) FRET、原位 PLA 等方法無(wú)法區(qū)分蛋白游離態(tài)與結(jié)合態(tài)，普遍存在信號(hào)弱、背景噪音高、定量精度不足的局限。由 Atlas Antibodies 開發(fā)的MolBoolean™技術(shù)，可在細(xì)胞與組織樣本中實(shí)現(xiàn)雙靶標(biāo)蛋白原位鄰近分析，同步檢測(cè)游離態(tài)與結(jié)合態(tài)蛋白（檢測(cè)范圍約 40nm），提供精準(zhǔn)的蛋白互作空間定量結(jié)果。

?

IHC/ICC、原位 PLA 與 MolBoolean 技術(shù)能力對(duì)比

MolBoolean 核心技術(shù)優(yōu)勢(shì)

雙態(tài)同步定量：同時(shí)檢出游離蛋白與互作復(fù)合物，完整呈現(xiàn)蛋白互作全景，填補(bǔ)傳統(tǒng)方法的信息盲區(qū)

歸一化精準(zhǔn)定量：以總蛋白水平歸一化互作數(shù)據(jù)，消除樣本上樣與表達(dá)差異干擾，結(jié)果可比性更強(qiáng)

無(wú)需基因改造：直接檢測(cè)天然細(xì)胞與組織樣本，避免外源標(biāo)簽干擾，結(jié)果更貼近真實(shí)生理狀態(tài)

超靈敏檢測(cè)：依托滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）技術(shù)將熒光信號(hào)放大 1000 倍，可穩(wěn)定檢出低豐度蛋白

靈活通用：兼容小鼠 / 兔源一抗，適配細(xì)胞系、臨床組織等多種樣本類型

檢測(cè)原理與操作流程

MolBoolean 試劑盒采用 ATTO565（590nm）與 ATTO647N（664nm）雙熒光報(bào)告體系，通過(guò)偶聯(lián)特異性 DNA 序列的二級(jí)鄰近探針識(shí)別靶標(biāo)一抗；當(dāng)兩蛋白發(fā)生互作、空間距離足夠接近時(shí)，雙探針共同啟動(dòng)滾環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)生雙熒光共定位信號(hào)，游離蛋白僅對(duì)應(yīng)單通道信號(hào)。

信號(hào)可通過(guò)常規(guī)熒光顯微鏡成像，配套分析軟件自動(dòng)分割信號(hào)，輸出游離態(tài)與結(jié)合態(tài)蛋白的占比結(jié)果。

MolBoolean 檢測(cè)原理與步驟示意圖

實(shí)驗(yàn)全程 2 天即可完成：

第 1 天（約 2 小時(shí)）：樣本封閉處理與一抗孵育

第 2 天（約 7-8 小時(shí)）：探針結(jié)合、DNA 標(biāo)記、連接、滾環(huán)擴(kuò)增與信號(hào)檢測(cè)

典型應(yīng)用場(chǎng)景

MolBoolean 技術(shù)已廣泛應(yīng)用于腫瘤研究、病毒機(jī)制、神經(jīng)科學(xué)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等領(lǐng)域，代表性應(yīng)用案例如下：

1. MCF7 細(xì)胞 E-cadherin/β-catenin 互作定量

定量結(jié)果：32% 游離 E - 鈣粘蛋白、19% 游離 β- 連環(huán)蛋白、49% 互作復(fù)合物，所有數(shù)據(jù)已歸一化至總蛋白水平。

?

MCF7 細(xì)胞 E-cadherin/β-catenin 染色結(jié)果

2. MCF7 細(xì)胞核膜蛋白 EMD/LMNB1 互作定位

直觀呈現(xiàn)核膜蛋白的空間分布與互作區(qū)域，支撐核結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)研究。

?

MCF7 細(xì)胞 EMD/LMNB1 染色結(jié)果

3. 人腎臟組織 ACE2/TMPRSS2 互作分析

定量結(jié)果：51% 游離 ACE2、17% 游離 TMPRSS2、32% 互作復(fù)合物，為病毒入侵組織的機(jī)制研究提供原位定量依據(jù)。

人腎臟 ACE2/TMPRSS2 染色結(jié)果

4. 人結(jié)腸組織 SATB2/HDAC1 互作檢測(cè)

清晰展示結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的空間互作特征，助力腸道疾病分子機(jī)制研究。

?

人結(jié)腸 SATB2/HDAC1 染色結(jié)果

試劑盒產(chǎn)品信息

MolBoolean™試劑盒（貨號(hào)：MolB00001）包含核心酶類、緩沖液、二級(jí)探針、寡核苷酸等 15 種組分，總體系 4.8mL；單盒可完成約 120 次細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（40μL / 樣）或 60 次組織實(shí)驗(yàn)（80μL / 樣）。

用戶可自行搭配小鼠 / 兔源一抗使用，推薦選用 Atlas Antibodies 高特異性驗(yàn)證抗體，保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

總結(jié)

MolBoolean 突破了傳統(tǒng)蛋白互作檢測(cè)的技術(shù)瓶頸，實(shí)現(xiàn)了原位環(huán)境下游離與結(jié)合態(tài)蛋白的同步精確定量，為細(xì)胞信號(hào)通路解析、疾病機(jī)制研究、藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證提供了更可靠的技術(shù)方案，是當(dāng)前原位蛋白互作研究的新一代高效工具。

?

?