醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG)是一種磁性樹脂，用于制備定制的磁性親和層析填料。在磁鐵的幫助下，可以很容易地控制和分離生物原料中的磁性顆粒。將生物特異性配體與醛活化瓊脂糖偶聯(lián)是一項(xiàng)成功且有據(jù)可查的技術(shù)。
醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG)通過還原胺化反應(yīng)與含有伯胺基團(tuán)的配體形成化學(xué)穩(wěn)定的仲胺鍵。這種預(yù)活化的瓊脂糖基質(zhì)可以很容易地用于制作各種定制的親和層析填料，適用于小規(guī)模和大規(guī)模純化應(yīng)用。
1. 屬性
有2種不同的基礎(chǔ)基質(zhì)可供選擇，適合各種待偶聯(lián)或純化的分子。
·醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG 4 HF)由高度交聯(lián)的4%磁性瓊脂糖制成。其大孔徑適用于偶聯(lián)或純化大分子。它具有高機(jī)械剛度，可在更嚴(yán)苛的條件下操作使用。
·醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG 6 HF)由高度交聯(lián)的6%磁性瓊脂糖制成。其適中的孔徑適用于偶聯(lián)較小的分子。它也具有高機(jī)械剛度，可在更嚴(yán)苛的條件下操作使用。
由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性，長(zhǎng)期以來一直用于色譜分離。這些顆粒具有開孔結(jié)構(gòu)，對(duì)各種分子具有出色的傳質(zhì)性能。基礎(chǔ)基質(zhì)通過氧化被激活以產(chǎn)生醛基。它直接與分子中的伯胺基反應(yīng)，在還原劑存在的情況下被固定化。
醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG)以20%乙醇中的水懸浮液形式提供。
表1 醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG)的特性
2. 配體固定化
以下是一般的配體偶聯(lián)程序。
2.1 將目標(biāo)配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中，0.1 M磷酸鈉，pH 7.0。一般對(duì)于蛋白質(zhì)配體，凝膠的制備濃度為5 - 20 mg/ml。對(duì)于小配體，凝膠的制備濃度為10 - 100 μmol/ml。偶聯(lián)緩沖液的體積可以是固定凝膠體積的一半或相同。
2.2 在過濾裝置中用至少5 倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗醛活化凝膠。
2.3 將洗凈并吸干的凝膠（來自步驟 2.2）轉(zhuǎn)移到步驟 2.1 制備的溶液中。
如果發(fā)生變化，請(qǐng)調(diào)整 pH 值。
2.4 將漿液在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中在室溫下混合 2?4 小時(shí)。
2.5 將氰基硼氫化鈉（0.5 g/100 ml 活性凝膠）加入漿液中，過夜。注意：氰基硼氫化鈉有毒，應(yīng)格外小心處理。
2.6 用至少 5 倍凝膠體積的偶聯(lián)緩沖液清洗凝膠。
2.7 在氰基硼氫化鈉存在下，將凝膠重新懸浮到相同體積的封閉溶液，0.1 M Tris/HCl，pH 8.0或1 M乙醇胺，pH 8.0中2-3 小時(shí)。
2.8 用5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 1 M NaCl，pH 8.0 洗滌凝膠，然后用5倍體積的0.1 M醋酸鹽緩沖液 + 1 M NaCl，pH 4.0洗滌凝膠。
2.9 使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。
3. 固定化效率的一般考慮
3.1 pH
還原胺化可以在pH 4 - 10之間非常有效地進(jìn)行。但是可以優(yōu)化偶聯(lián)pH以獲得結(jié)果（例如，高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性）。
在配體溶解后要注意調(diào)整偶聯(lián)pH 值。
3.2 偶聯(lián)方案
應(yīng)避免使用含有氨基的溶液。
可以引入稀釋的某些有機(jī)溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測(cè)試此類溶劑的適用性。
耦合溶液的體積與活化凝膠的體積保持一致。建議使用0.5-1 : 1 v/v的理想比例。
3.3 鹽
偶聯(lián)緩沖液中鹽的存在（例如0.5 M 或飽和）可以提高固定效率。
3.4 基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化基團(tuán)
對(duì)于某些配體或應(yīng)用，基礎(chǔ)基質(zhì)中的活化水平可能過高，偶聯(lián)配體的活性可能會(huì)降低。
在降低的 pH 值下偶聯(lián)可能會(huì)減少配體分子的連接點(diǎn)。它可以提高偶聯(lián)配體的活性?；罨鶊F(tuán)的受控封閉，例如在添加配體前幾個(gè)小時(shí)用 5?10 mM 封閉緩沖液孵育凝膠，也可以減少過度偶聯(lián)問題。
3.5 反應(yīng)時(shí)間
可以優(yōu)化偶聯(lián)過程中配體和活化填料之間的接觸時(shí)間以保持配體的生物活性。
3.6 還原劑的選擇
其他還原劑如硼氫化鈉可用于偶聯(lián)反應(yīng)。氰基硼氫化物是一種較溫和的還原劑，它只還原醛基和伯胺基之間形成的中間席夫堿，得到穩(wěn)定的仲胺鍵。硼氫化物是一種更強(qiáng)的還原劑，可還原席夫堿和未偶聯(lián)的醛基。
3.7 屏蔽剩余的活化配體
未與配體反應(yīng)的活化基團(tuán)應(yīng)通過添加含有pH 8 - 9伯胺的額外小分子（例如 Tris 或乙醇胺）來封端。
3.8 最終填料的洗滌
偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體完全洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。
4. 固定化親和填料的使用
配體偶聯(lián)填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。
5. 儲(chǔ)存
醛基活化磁性瓊脂糖層析填料(Aldehyde-activated SepFast MAG)應(yīng)在8℃下儲(chǔ)存。偶聯(lián)的濕填料應(yīng)在防菌劑（例如20%乙醇）存在的情況下于4-8℃儲(chǔ)存。切勿凍存耦合填料。
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