質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑 Omifection

一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介。

Omifection 是一款非脂質(zhì)體類真核細(xì)胞 DNA 轉(zhuǎn)染試劑，主要用于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染，在多種細(xì)胞中都具有較高的轉(zhuǎn)染效率和超低的細(xì)胞毒性，廣泛用于蛋白表達(dá)、文庫篩選和慢病毒包裝等實(shí)驗(yàn)。

二、運(yùn)輸與存儲(chǔ)。

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸，4 ℃保存，嚴(yán)禁凍存。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì)。

1. 轉(zhuǎn)染效率高。適用于多種類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

2. 細(xì)胞毒性低。Omifection 對(duì)多種細(xì)胞沒有細(xì)胞毒性。

3. 操作方便。本產(chǎn)品不受抗生素和血清的影響，轉(zhuǎn)染前細(xì)胞不用換液。

四、使用說明。

1. 以 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)體系，細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟如下：。

2. 細(xì)胞培養(yǎng)。胰酶消化法收集細(xì)胞，接種到 6 孔板中，24 h 后細(xì)胞密度達(dá)到 50%-80%。

3. 轉(zhuǎn)染復(fù)合體制備。移取 200 μL OPTI-MEM 培養(yǎng)液 (Gibco）加入滅菌的 EP 管（1.5 mL)中，再依次加入 2 μg 質(zhì)粒（體積依據(jù)質(zhì)粒濃度計(jì)算）和 6 μL Omifection 轉(zhuǎn)染試劑，混合 10-20 次，室溫靜置 15-30 min （30 min 轉(zhuǎn)染效果會(huì)更好），形成轉(zhuǎn)染復(fù)合體。

4. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將轉(zhuǎn)染復(fù)合體加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，輕搖混勻，轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

5. 轉(zhuǎn)染 6-12 h 后換液，48 h 檢測(cè)外源蛋白表達(dá)情況（如熒光顯微鏡下檢測(cè) GFP 熒光）。

五、注意事項(xiàng)。

1. 本產(chǎn)品嚴(yán)禁凍存，否則轉(zhuǎn)染效率降低。

2. 質(zhì)粒 DNA 與 Omifection 的比例（μg:μL）為 1:3 時(shí)能夠在大部分細(xì)胞中取得轉(zhuǎn)染效果。

3. Omifection 與質(zhì)粒 DNA 加入 OPTI-MEM 培養(yǎng)液中后，劇烈混合，以便徹底混勻，并需要靜置15-30 min，以便形成轉(zhuǎn)染復(fù)合體。

4. 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)一般在細(xì)胞傳代 24 h 后進(jìn)行，保證細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，生長狀態(tài)良好。

5. Omifection 對(duì)大部分細(xì)胞沒有毒性，如果不考慮轉(zhuǎn)染試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，轉(zhuǎn)染后可以不換液。

六、轉(zhuǎn)染效果檢測(cè)。

HEK293 細(xì)胞接種于 6 孔板，24 h 后利用 Omifection 和 Lipofectamine 2000（LIPO 2000）轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白（GFP）編碼質(zhì)粒，48 h 后熒光顯微鏡下檢測(cè) GFP，并拍照。