細(xì)胞核提取試劑盒

一、產(chǎn)品簡介。

細(xì)胞核是細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器，也是遺傳物質(zhì)分布的重要場所，分離細(xì)胞核，可用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品利用蔗糖密度梯度離心法，能夠快速且完整的分離細(xì)胞核。

二、運(yùn)輸與存儲條件。

本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸，4 ℃保存，有效期 12 個(gè)月。

三、特點(diǎn)與優(yōu)勢。

1. 本產(chǎn)品操作簡單，可以快速分離細(xì)胞核。

2. 本產(chǎn)品分離的細(xì)胞核完整，純度高。

四、自備試劑與耗材。

PBS、RIPA 裂解液（不含 SDS）、1.5 ml 離心管、震蕩混勻儀（Vortex mixer）、冷凍離心機(jī)。

五、使用說明。

1. 細(xì)胞處理。胰酶消化法收集貼壁生長細(xì)胞，或離心法直接收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，每個(gè)樣品中細(xì)胞數(shù)量為 2×107，加入 1 ml Buffer NA，震蕩（Vortex），重懸細(xì)胞。

2. 細(xì)胞裂解。將細(xì)胞重懸液轉(zhuǎn)入勻漿器，勻漿 50-100 次，至顯微鏡下觀察到 80%以上細(xì)胞都破碎為止。

3. 離心。將細(xì)胞勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5 ml 離心管，600×g，4 ℃離心 10 min，上清轉(zhuǎn)移至新的 1.5 ml離心管，即為細(xì)胞漿（可保存在-80 ℃），沉淀為粗細(xì)胞核。

4. 粗細(xì)胞核中加入 1 ml Buffer NA 重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清。

5. 細(xì)胞核純化。向細(xì)胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NB，震蕩（vortex）重懸，16,000×g，4 ℃離心15-30 min，棄上清。

6. 細(xì)胞核洗滌。向細(xì)胞核沉淀中加入 1 ml Buffer NA，震蕩（vortex）重懸，600×g，4 ℃離心 10 min，棄上清，沉淀即為純化細(xì)胞核。

7. 細(xì)胞核可暫時(shí)存放在-80 ℃冰箱中，也可立即裂解，抽提核蛋白。

8. 細(xì)胞核裂解。主要包括以下二種方式。

1) 變性裂解液裂解。利用本公司的細(xì)胞裂解液（Laemmli Buffer，2×）重懸細(xì)胞核沉淀，裂解細(xì)胞核，提取細(xì)胞核蛋白，用于 western blot 分析。但提取蛋白已經(jīng)變性，不可用于酶活性測定。

2) RIPA 裂解液裂解。利用溫和的 RIPA 裂解液（不含 SDS）重懸細(xì)胞核沉淀，裂解細(xì)胞核，提取蛋白，用于酶活性測定及 western blot 等實(shí)驗(yàn)。

六、注意事項(xiàng)

1. 整個(gè)操作過程需在低溫條件下進(jìn)行，所用試劑提前預(yù)冷。

2. 為了減少其它細(xì)胞器污染，提取的細(xì)胞漿溶液可以12,000×g，4 ℃離心15 min，棄沉淀，上清即為純化后的細(xì)胞漿，轉(zhuǎn)移至新的離心管，凍存。

3. 為了抑制蛋白降解，實(shí)驗(yàn)過程中可添加蛋白酶抑制劑（如cocktail等）。