一、細(xì)胞基本屬性

細(xì)胞名稱：小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

細(xì)胞別稱：A20

細(xì)胞貨號(hào)：SNL-153

細(xì)胞種屬：小鼠

生長(zhǎng)情況：半貼壁

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法：

1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞；

2.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；

3.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)：半貼壁細(xì)胞會(huì)附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。

三、細(xì)胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬(wàn)/ml，1ml每管

凍存方法：

1.離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；

2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；

將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存

注意事項(xiàng)：凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

Tips：

1.細(xì)胞半貼壁圓形生長(zhǎng)，部分懸浮圓形，傳代時(shí)均可收集培養(yǎng)，換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細(xì)胞較多活性較好時(shí)可以不要懸浮的細(xì)胞；

2.傳代有部分細(xì)胞碎片可以換液后用PBS潤(rùn)洗細(xì)胞清除，使用的PBS需要恢復(fù)到室溫，加入時(shí)不要沖到細(xì)胞面，潤(rùn)洗盡量輕柔；

3.該細(xì)胞生長(zhǎng)較快，培養(yǎng)基消耗較快，培養(yǎng)時(shí)注意密切關(guān)注細(xì)胞狀態(tài)，密度較高、培養(yǎng)基有變黃趨勢(shì)時(shí)及時(shí)換液避免細(xì)胞狀態(tài)變差；

我們推薦使用尚恩生物A20（小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）專用完全培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：SNLM-153）作為體外培養(yǎng)A20（小鼠B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞）的培養(yǎng)基。