一、細胞基本屬性

細胞名稱：小鼠B細胞淋巴瘤細胞

細胞別稱：A20

細胞貨號：SNL-153

細胞種屬：小鼠

生長情況：半貼壁

培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、細胞培養(yǎng)操作

換液周期：2-3天

培養(yǎng)基體積：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法：

1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞；

2.混勻細胞，收集細胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；

3.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

補足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項：半貼壁細胞會附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落，不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細胞操作，吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

三、細胞凍存操作

凍存液配方：92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格：200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法：

1.離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；

將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存

注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

Tips：

1.細胞半貼壁圓形生長，部分懸浮圓形，傳代時均可收集培養(yǎng)，換液時將懸浮細胞離心收集后重新接回原瓶，若貼壁細胞較多活性較好時可以不要懸浮的細胞；

2.傳代有部分細胞碎片可以換液后用PBS潤洗細胞清除，使用的PBS需要恢復到室溫，加入時不要沖到細胞面，潤洗盡量輕柔；

3.該細胞生長較快，培養(yǎng)基消耗較快，培養(yǎng)時注意密切關注細胞狀態(tài)，密度較高、培養(yǎng)基有變黃趨勢時及時換液避免細胞狀態(tài)變差；

我們推薦使用尚恩生物A20（小鼠B細胞淋巴瘤細胞）專用完全培養(yǎng)基（產品貨號：SNLM-153）作為體外培養(yǎng)A20（小鼠B細胞淋巴瘤細胞）的培養(yǎng)基。