果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒說明書
分光光度法50管/24樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒測定意義：
果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛，主要來源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價值。
測定原理：
果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：
1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 培養(yǎng)液：直接測定。
果膠裂解酶（pectinate lyases，PL）試劑盒測定操作表：
| 對照管 | 測定管 |
試劑一（μL） |
| 600 |
試劑二（μL） | 600 |
|
40℃溫育3min |
酶液（μL） | 100 | 100 |
混勻，40℃反應(yīng)30min |
試劑三（μL） | 300 | 300 |
混勻，對照管調(diào)零，1mL石英比色皿測定235nm處吸光值A。 |
酶活性計(jì)算公式：
1. 組織中PL活性
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（nmol/min/mg prot）= A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 64.1×A÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（nmol/min/g 鮮重）= A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T
= 64.1×A÷W
2. 細(xì)胞PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每104個細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（nmol/min/104cell）= A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 64.1×A÷細(xì)胞數(shù)量
3. 培養(yǎng)液PL活性
酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。
PL活性（nmol/min/mL）= A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T
= 64.1×A
ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，30min
關(guān)鍵字： 果膠裂解酶（pectinate lyas;果膠裂解酶（pectinate lyas;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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