細胞簡介 P2/P3代細胞

臍帶間充質干細胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞，廣泛應用于組織工程，細胞治療和基因治療。江苑生物人臍帶間質干細胞取自健康足月分娩孕婦的臍帶，擁有強大的自我更新能力并具有多向分化潛能。

方法簡介 P2/P3代細胞

江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質干細胞采用組織貼塊法制備而來，細胞總量約為1×10⁶ cells /T25瓶。

質量檢測 P2/P3代細胞

江苑生物實驗室分離的人臍帶間充質干細胞經測試，具有的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。流式檢測結果顯示，HLA-DR、CD34、CD45陰性（<5%）；CD90、CD105、CD73陽性（>90%）。且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、內毒素、細菌、酵母和真菌等。

運輸和保存 P2/P3代細胞

1．1 mL凍存管包裝干冰運輸，收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2．T25瓶培養(yǎng)的細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

培養(yǎng)瓶細胞接收后的處理 P2/P3代細胞

1．收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2．請在顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據。

3．細胞收貨脫落：若細胞在快遞運輸途中因振動脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，讓少數(shù)脫落的細胞可再附著生長。若仍有脫落聚集的細胞，則 (1) 收集所有細胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化2 min左右；(3) 向離心管內加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補加1-5% FBS，促進貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；(5) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

4．收貨細胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，若細胞生長密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達80%-90%以上，可以對細胞進行傳代處理。

5．運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用合適的新鮮培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。

凍存細胞接收后的處理 P2/P3代細胞

收貨后-80℃冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇。

細胞復蘇：將含有1 mL細胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。將凍存管中細胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

培養(yǎng)信息 P2/P3代細胞

培養(yǎng)基：10% FBS、DMEM/F12、1% Penicillin-Streptomycin

換液頻率：每2-3天換液一次。

組織來源：人臍帶

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)更佳

消化液：0.25%胰蛋白酶，37℃消化2 min左右；1：3-5傳代

培養(yǎng)條件：氣相：空氣 95%，CO₂ 5%；溫度：37℃

人臍帶間充質干細胞體外培養(yǎng)周期有限，建議您收到細胞后盡快進行相關實驗