PKH26熒光細(xì)胞連接試劑盒采用采用本公司專利膜標(biāo)記技術(shù)，能夠?qū)в休^長脂質(zhì)尾巴的黃色-橙色熒光染料結(jié)合到細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)域上。染色方式依賴于細(xì)胞與膜的類型，主要用于細(xì)胞體外標(biāo)記、體外細(xì)胞增殖研究及體內(nèi)外細(xì)胞示蹤研究。試劑盒中提供染色過程中所需的溶劑（稀釋液C），該溶劑可以可以在染色過程中，增加染料溶解度和染色效率，同時(shí)維持細(xì)胞活力。稀釋液C與哺乳動物細(xì)胞等滲，且不含去垢劑或有機(jī)溶劑，也不含生理鹽水和緩沖鹽。根據(jù)細(xì)胞類型及標(biāo)記后細(xì)胞膜內(nèi)在的變化，標(biāo)記后的細(xì)胞表面會由均一透亮變得有點(diǎn)狀凸起或補(bǔ)丁狀。但在生理范圍內(nèi)，PKH26熒光不受pH的影響，每個(gè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度與染料標(biāo)記位置無關(guān)。

PKH26熒光在黃色-橙色區(qū)域（λex=551 nm,  λem=567 nm），可用來標(biāo)記追蹤體內(nèi)外多種細(xì)胞。在細(xì)胞毒性分析，熒光蛋白、抗體或DNA染料在該區(qū)域發(fā)出的紫色、綠色、紅色和遠(yuǎn)紅外等，不會與PKH26產(chǎn)生干擾。PKH26最常被用于基于染料稀釋增殖的分析的染料稀釋應(yīng)用，包括建立抗原特異性前體頻譜和正常或腫瘤組織中靜止或緩慢干細(xì)胞或祖細(xì)胞的鑒定。同時(shí)PKH26也可用于監(jiān)測外來病毒、血小板和其他納米顆粒的攝入；干細(xì)胞分裂過程中膜的分配；細(xì)胞-細(xì)胞之間膜的轉(zhuǎn)移；細(xì)胞吞噬作用；抗原呈遞；粘附；通過間隙連接的信號傳遞；以及組織切片中的神經(jīng)元遷移。PKH26熒光穩(wěn)定性很強(qiáng)，特別是標(biāo)記的細(xì)胞的研究周期超過一周時(shí)PKH26被用于體內(nèi)細(xì)胞追蹤研究。

注意事項(xiàng)：

● 染料的工作液隨用隨配，不要將配好的染料貯存，影響染?效果。

●PKH26染色過程中，不能存在疊氮化物或代謝毒性物。

●雖然貼壁細(xì)胞也可以染色，但為獲得均勻染色，單細(xì)胞懸液。因此用蛋白酶（trypsin/EDTA）將貼壁細(xì)胞消化成單個(gè)懸浮細(xì)胞后再染色效果更佳。

●染色前去除血清和脂質(zhì)以提高染色效果。

●鹽的存在會導(dǎo)致染料形成顆粒，干擾染色反應(yīng)。因此，加染料前細(xì)胞重新懸置是很重要的。染料應(yīng)直接加到細(xì)胞懸液中，而不是加到細(xì)胞團(tuán)上。

● 過度的細(xì)胞標(biāo)記將導(dǎo)致膜完整性喪失、細(xì)胞數(shù)量下降。本樣品細(xì)胞和染料濃度是參照濃度適合大部分細(xì)胞，但染料/細(xì)胞由使用者根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康臎Q定，另外使用者還要評估細(xì)胞的生存力（排碘），熒光強(qiáng)度，熒光峰值的變異系數(shù)，染色的均勻性。

● 染?濃度根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少?異。不同的細(xì)胞種類標(biāo)記后可以?蹤的代次或時(shí)間差異較?，請根據(jù)實(shí)際情況或參考?獻(xiàn)進(jìn)?檢測。

操作注意：快速均勻的混合對標(biāo)記非常重要，為獲得效果應(yīng)采取下述措施：
1） 混合時(shí)細(xì)胞懸液和工作染液應(yīng)等量；
2） 避免染太多(>5ml)或太少（<100ul）的液體。避免用沾血清的移液管加染料；
3） 液體量應(yīng)盡可能精確以保證細(xì)胞和染料濃度被精確復(fù)制。
4）染料和稀釋液作用于細(xì)胞的時(shí)間盡量短，有一定毒性。可用稀釋液按上述步驟作用于細(xì)胞看其受損程度。
5） 加等量血清終止反應(yīng)，在終止染色反應(yīng)前別離心稀釋液C中的細(xì)胞，清洗時(shí)用含血清培養(yǎng)基可增加清洗效果。
6） 細(xì)胞應(yīng)單獨(dú)移至新試管中離心，清洗3次時(shí)不用稀釋液C而用培養(yǎng)基。
7） 可用于體外干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等的標(biāo)記較理想。
8） 全細(xì)胞標(biāo)記應(yīng)先于單抗染色的標(biāo)記，當(dāng)4℃單抗染色時(shí)細(xì)胞跟蹤探針將保持穩(wěn)定；如后于單抗染色的標(biāo)記，很可能出現(xiàn)“蓋帽”現(xiàn)象。
9） 染色細(xì)胞用2%多聚甲醛固定穩(wěn)定性達(dá)3w以上。

所需材料：

均勻的單細(xì)胞懸液；含血清培養(yǎng)基；無血清培養(yǎng)基或不含Ca2+Mg2+的PBS液；血清、白蛋白或與培養(yǎng)基兼容的蛋白源；聚丙烯錐形離心管；溫度可控的離心機(jī)（0-1000g）；熒光分析儀（熒光計(jì)，熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀，熒光圖象分析儀）；超凈臺；細(xì)胞計(jì)數(shù)儀；載玻片。

操作步驟：