參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>
型號(hào) : EY00P1691
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實(shí)驗(yàn)操作過程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進(jìn)行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡(jiǎn)短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中， 然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時(shí)快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
表 2. CHO control DNA 的稀釋
稀釋管 | 稀釋體積 | 濃度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測(cè)樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO control DNA 的加樣濃度 (以制備加 45pg CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測(cè)樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標(biāo)記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備
根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測(cè)樣本數(shù)量，計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個(gè)重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)= (6 個(gè)濃度梯度+1 個(gè)無模板對(duì)照 NTC+1 個(gè)陰性質(zhì)控 NEG+待測(cè)樣本×2) ×3 注：待測(cè)樣本×2 是為了讓每個(gè)待測(cè)樣本檢測(cè)時(shí)都同時(shí)做樣本 ERC 。 2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進(jìn)行加樣：
表 3.各反應(yīng)孔加樣示例
標(biāo)準(zhǔn)曲線 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待測(cè)樣本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待測(cè)樣本 |
ERC 樣本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 樣本 |
注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
119637-67-1 Moguisteine 250mg Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒H型探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
119645-65-7 Z-Ala-Trp-OH 5g Middle East Respiratory Syndrome-(MERS-CoV)中東呼吸綜合征探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
119645-65-7 Z-Ala-Trp-OH 25g Middle East Respiratory Syndrome-(MERS-CoV)中東呼吸綜合征探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1196509-60-0 AZD7594 5mg Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus(VEEV)委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1196509-60-0 AZD7594 10mg Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus(VEEV)委內(nèi)瑞拉馬腦脊髓炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA核酸檢測(cè)試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ?/span>37933-88-3 Ac-Val-NH2 1g Cortex ailanthi椿皮LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
16395-58-7 Ac-Pro-NH2 1g Herba sedi垂盆草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
23361-37-7 Ac-Met-NH2 1g Herba sedi垂盆草LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
56711-06-9 Ac-Ile-NH2 1g Rhizoma chuanxiong川芎LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
18839-88-8 Ac-Gln-NH2 250mg Rhizoma chuanxiong川芎LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1108147-88-1 MCOPPB tri 10mM*1mLinDMSO Tetrameres americana美洲四棱線蟲LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1108147-88-1 MCOPPB tri 10mg Tetrameres americana美洲四棱線蟲LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1108147-88-1 MCOPPB tri 25mg Herpesvirus Simiae(HVS)猿皰疹病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1108147-88-1 MCOPPB tri 50mg Herpesvirus Simiae(HVS)猿皰疹病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
1108147-88-1 MCOPPB tri 100mg Avian Mycoplasma spp.禽類支原體通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度
關(guān)鍵字： 對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA;對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA;對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA;對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA;對(duì)蝦傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）RNA;
上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑等為一體的科研產(chǎn)品銷售企業(yè)，公司自成立以來，秉承""全心全意服務(wù)于科研工作者""的企業(yè)理念，立足生物科技領(lǐng)域，運(yùn)用生物技術(shù)和科研試劑，發(fā)展現(xiàn)代生物科技，為各類大中小醫(yī)院及其它醫(yī)療機(jī)構(gòu)、高等院校、科研院所、企事業(yè)單位提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，服務(wù)生物科技領(lǐng)域的科學(xué)研究人員。
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