中文名：伊文思藍(lán)染色液 (5%)

英文名：Evans Blue Staining Solution (5%)

純度：BioReagent，生物染色劑，用于顯微鏡，5%，細(xì)胞分析，細(xì)胞染色，Live/Dead Cell Assay

貨號(hào)：E1507840

Cas號(hào)：314-13-6

存儲(chǔ)溫度：2-8°C儲(chǔ)存,避光

運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸

穩(wěn)定性存儲(chǔ)：Store at 2-8℃ long term (12 months). Store in the dark.

產(chǎn)品介紹：

  儲(chǔ)存緩沖液：磷酸鹽溶液

  伊文思藍(lán) (Evans Blue)又稱偶氮藍(lán)，分子式C??H??N?Na?O??S?，分子量為960.81，CAS號(hào)為314-13-6。伊文思藍(lán)屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小與血漿白蛋白相近，而且在血液中與血漿白蛋白有很高的親和力，因此在神經(jīng)科學(xué)研究中常被用于示蹤觀察血腦屏障 (BBB)的完整性，也用于細(xì)胞染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，亦可測(cè)定血容量。伊文思藍(lán)作臨床藥物用于測(cè)定血漿和血容量，也可作動(dòng)脈插管的定位。正常情況下血漿白蛋白無法透過血腦屏障，所以染色后如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障完整，與血漿白蛋白結(jié)合的伊文思藍(lán)無法使其著色，相反如果神經(jīng)系統(tǒng)血腦屏障被破壞，伊文思藍(lán)就可以進(jìn)入神經(jīng)系統(tǒng)并使其著色，在熒光波長(zhǎng)470nm、540nm處有強(qiáng)峰，680 nm處有弱峰，可以使用化學(xué)透析法和比色法進(jìn)行檢測(cè)。

  伊文思藍(lán)與臺(tái)盼藍(lán)都是細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的完整性和細(xì)胞是否存活；活細(xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色，伊文思藍(lán)染色后通過顯微鏡下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量，其中0.5%為最常用的濃度；活細(xì)胞因有外排功能而無法被伊文思藍(lán)染色，因此可以通過此方法在顯微鏡下區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞，但無法區(qū)分死亡與壞死。伊文思藍(lán)染色液 (5%)主要由伊文思藍(lán)、磷酸鹽溶液等組成。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、注射器、組織勻漿器

2、PBS、三氯乙酸或丙酮

操作步驟(僅供參考)：

使用前，將Evans Blue Staining Solution (5%)用PBS稀釋成Evans Blue Staining Solution (0.5%) (M1507837)。

(一)血腦屏障通透性

1、取處理后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 (以小鼠為例)，經(jīng)尾靜脈或股靜脈按照 2-3ml/kg的比例注射Evans Blue Staining Solution (0.5%) (M1507837) 數(shù)秒至1分鐘內(nèi)，小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍(lán)色，0.5-1h后處死小鼠，取目的腦組織。

2、腦組織置于1.5ml離心管中，加入1ml PBS，迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿, 1000g離心15min。

3、取上清，加入等量三氯乙酸，4℃孵育18-24h；該步驟亦可采用如下操作: 取上清，按上清：丙酮=3：7比例加入丙酮，室溫孵育24h。

4、1000g離心20-30 min或2000g離心15min。

5、取上述溶液1-2ml，用分光光度計(jì)測(cè)620 nm處吸光值 (OD值)，同時(shí)測(cè)定已知不同梯度的標(biāo)準(zhǔn)伊文思藍(lán)的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)待測(cè)樣品的伊文思藍(lán)含量。

(二)活細(xì)胞染色

1、取100μl重懸細(xì)胞到常規(guī)1.5ml或0.5ml離心管內(nèi)，加入100μl Evans Blue Staining Solution (0.5%) (M1507837) 輕輕混勻，染色3min (染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)，但不宜超過10min)。

2、吸取少量經(jīng)過染色后的細(xì)胞，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。通常如果要比較精確地進(jìn)行定量，每個(gè)細(xì)胞樣品至少數(shù)500個(gè)細(xì)胞，數(shù)出藍(lán)色細(xì)胞和細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算公式如下：

細(xì)胞存活率＝(細(xì)胞總數(shù)－藍(lán)色細(xì)胞數(shù))/細(xì)胞總數(shù)×100%

(三)種子染色

1、用刀片做橫切和沿種胚中央準(zhǔn)確縱切，加入染色液染色3-5min。

2、蒸餾水中浸泡20-60min，視脫色程度而定。

注意事項(xiàng)：

1、 Evans Blue Staining Solution (5%)對(duì)人體有輕微毒性，請(qǐng)小心防護(hù)。

2、細(xì)胞染色時(shí)，注意凋亡小體偶爾也有拒染現(xiàn)象。

3、血腦屏障通透性實(shí)驗(yàn)中，Evans Blue Staining Solution (0.5%)(M1507837)注射量應(yīng)根據(jù)不同動(dòng)物以及動(dòng)物的重量調(diào)整。

4、最好采用低溫冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心。

5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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