基本描述
產(chǎn)品名稱：重組全能核酸酶
規(guī)格或純度：無載體,生物活性,ActiBioPure?,EnzymoPure?,His標簽,≥99%(SDS-PAGE)
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品介紹
? ? ? ?阿拉丁生產(chǎn)的全能核酸酶是一種是一種來源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在非常寬泛的條件下降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然或變性等各種形式的 DNA 或 RNA，產(chǎn)生長度為 3 至 5 個堿基的 5'-單磷酸寡核苷酸。本產(chǎn)品用途廣泛，常用于重組蛋白、病毒疫苗等生物制品中去除核酸，以及有效降低細胞、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等。本產(chǎn)品帶有 N 端 His-tag，可以通過鎳柱吸附去除。本產(chǎn)品為超純級，純度≥99%，無蛋白酶活性，內(nèi)毒素極低，<0.25EU/KU。全能核酸酶，又稱超級核酸酶或廣譜核酸酶，與 Benzonase endonuclease、TurboNuclease 等類似酶的氨基酸序列基本一致(主要是蛋白的氨基端或羧基端所帶的標簽或殘留氨基酸序列略有不同)，具有同樣的酶催化活性和相同的用途，大多數(shù)情況下可以相互替代。具體使用時，需要注意純度和內(nèi)毒素水平對于后續(xù)分析檢測的影響。超級核酸酶的穩(wěn)定性非常好。37℃保存 3-5 周，超級核酸酶能保持>90%的酶活性，在 25℃保存 10 周后，酶活性基本沒有變化。超級核酸酶采用自主研發(fā)技術(shù)平臺表達、純化，表達純化獲得的重組蛋白與 Serratia marcescens 中的天然核酸內(nèi)切酶氨基酸序列完全一致，N 端融合 His-tag，沒有額外的氨基酸，與天然粘質(zhì)沙雷氏菌的核酸內(nèi)切酶相比在生化特性方面相同。
產(chǎn)品基本信息
| 名稱(Name) | 全能核酸酶 | | 別名(Synonyms) | 全能核酸酶；超級核酸酶；廣譜核酸酶；活性核酸酶；Benzonase Nuclease；Benzonase Endonuclease；TurboNuclease，Universal Nuclease | | ?CAS 號(CAS No.) | ?9025-65-4 | | 分子量(MW) | ?~26.7kDa | | 外觀(Physical appearance) | 液體 | | 活性(Biological activity) | ?50U/μl | | 活力單位(Unit definition) | One unit of Super Nuclease is defined as the amount of enzyme that causes a ?A260 of 1.0 (equivalent to the complete digestion of 37μg DNA) in 30min. | | 純度(Purity) | ?≥ 99% by SDS-PAGE, protease-free | | 配方(Formulation) | ?10mM Tris (pH7.4), 500mM NaCl, 2mM MgCl?, 50% glycerol |
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產(chǎn)品應用
? ? 有效去除重組蛋白中的核酸；有效去除病毒疫苗和普通重組病毒中的核酸，使其符合 FDA 指南中核酸污染的要求；實時定量 PCR 測定重組病毒滴度時去除病毒包裝細胞的核酸和包裝質(zhì)粒；降低細菌或細胞裂解液由核酸導致的粘度使其易于后續(xù)操作；防止細胞成團；提高包涵體蛋白(inclusionbodies)復性率；在二維凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)的過程中，提高蛋白質(zhì)的分離效率和雙向電泳的分辨率。
產(chǎn)品優(yōu)勢
? ? 本產(chǎn)品內(nèi)毒素極低。本產(chǎn)品適用范圍寬。本產(chǎn)品活性好，效果佳。本產(chǎn)品可有效降低細胞或細菌裂解液粘度。
使用說明
? 1.用于降低細胞、組織或細菌裂解液的粘度。
? a. 對于培養(yǎng)細胞樣品：
? ? (a)對于貼壁細胞：吸除細胞培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。每 1ml RIPA
裂解液、Western 及 IP 細胞裂解液或其它細胞裂解液中加入 0.1-1μl 本公司的超級核酸酶，然后按照裂解液的使用說明用于貼壁細胞的裂解。加入含有超級核酸酶的裂解液后，冰浴或室溫孵育 5-30 分鐘，收集裂解液，10,000-14,000×g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可用于后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等實驗。
? ? (b)對于懸浮細胞：250-1000×g 室溫離心 5min，吸除上清，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)，再離心收集細胞，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。如果細胞量較多，必須分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再用
于后續(xù)的裂解。每 1ml 1ml RIPA 裂解液、Western 及 IP 細胞裂解液或其它細胞裂解液中加入 0.1-1μl 本超級核酸酶，然后按照裂解液的使用說明用于貼壁細胞的裂解。加入含有超級核酸酶的裂解液后，冰浴或室溫孵育 5-30 分鐘，10,000-14,000×g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可用于后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等實驗。
裂解液用量說明：通常 6 孔板每孔貼壁細胞或每 100 萬動物細胞加入 100 微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高或者細胞比較大的情況，可以適當加大裂解液的用量到 150-250 微升。
? b.對于組織樣品：
? ? (a)把組織剪切成細小的碎片。
? ? (b)按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入 1ml RIPA 裂解液、Western 及 IP 細胞裂解液或其它細胞裂解液，同時加入0.1-1μl 本超級核酸酶。
? ? (c)用玻璃勻漿器勻漿，或使用手持式組織研磨儀、高通量組織研磨儀 進行研磨，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液進行裂解。
? ? (d)充分裂解后，冰浴或室溫孵育 5-30 分鐘，10,000-14,000×g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
? ? (e)如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器或研磨設(shè)備，缺點是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。
? c.對于細菌或酵母樣品：
? ? (a) 對于 1ml 菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗滌一次，充分去除液體后，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細菌或酵母盡量彈散。加入 100-200 微升 RIPA 裂解液或其它細胞裂解液，同時加入 0.1-1μl 本公司的超級核酸酶。? ??
? ? (b) 輕輕 vortex 或者彈擊管底以混勻，冰浴或室溫孵育 5-30 分鐘。如果希望獲得更好的裂解效果，細菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用裂解液進行裂解。
? ?注： RIPA 裂解液、Western 及 IP 細胞裂解液含有不同濃度的 Triton X-100 或 NP-40、SDS 及脫氧膽酸鈉等，對酶活性有一定的影響，所以需要適當增加酶量或延長孵育時間。
2.去除重組蛋白中的核酸：
? ? 重組蛋白生產(chǎn)時對核酸殘留有嚴格的要求，很多情況可以參考如下描述以去除殘留的核酸。生物樣品中 DNA 濃度范圍通常在 0.5-5μg/ml之間，如下采用高負荷 DNA 濃度 50μg/ml 的鯡魚精子 DNA 溶液進行的測試，反應緩沖液為 50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM MgCl?, 0.1
mg/ml BSA。
? ? a.37℃反應 22h，反應液中超級核酸酶終濃度為 90U/ml 時，可降解所有 DNA；反應液中超級核酸酶終濃度為 9U/ml 時，可降 95%的 DNA；
? ? b.反應液中超級核酸酶終濃度為 90U/ml 時，23℃反應 30h 可降解所有 DNA；0℃反應 30h 可降解 99%的 DNA；
c.樣品在 10mM Tris (pH8.0)緩沖液中，反應液中超級核酸酶終濃度為 90U/ml 時，23℃反應 22h 可降解所有 DNA；樣品在 PBS 緩沖液中，反應液中超級核酸酶終濃度為 90U/ml 時，23℃反應 30h 可降 95%的 DNA。
3.去除重組病毒中的核酸：
? ? ?對于在細胞中包裝生產(chǎn)的重組病毒，在收集的細胞上清中直接加入超級核酸酶，使之終濃度約為 1U/ml，30-34℃反應 4-8h，即可有效地將宿主細胞的核酸(DNA 及 RNA)降解為 3-5bp 的核酸片段。
4.實時定量 PCR 法測定重組病毒滴度時去除核酸干擾：
? ? ?在檢測重組病毒滴度時，超級核酸酶可以去除病毒上清中基因組 DNA、RNA 和質(zhì)粒等核酸干擾，通過在載體的長末端重復序列區(qū)(LTR)設(shè)計引物，利用熒光實時定量 PCR 測定重組病毒中 LTR 拷貝數(shù)來測定病毒顆粒數(shù)。建議在 PCR 管中按照下表體系進行設(shè)置，37℃孵育 30min 去除核酸后，再對樣品進行梯度稀釋并實時定量 PCR 檢測。超級核酸酶終濃度 1-5U/ml，Reaction Buffer: 10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl?,0.1% PEG8000, 0.1mg/ml BSA.
| Component | ?Volume | | ?Sample (μl) | 5 | | 超級核酸酶 (0.01-0.1U) (μl) | ?x | | ?Reaction Buffer (μl) | ?50-x | | Total Volume (μl) | 50 |
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5.防止細胞成團：
? ? 超級核酸酶加入細胞培養(yǎng)液中可以防止細胞成團，特別是在解凍細胞時。例如全血分離的外周血單核細胞(peripheral blood mononuclearcells, PBMCs)解凍后易聚集在一起，影響后續(xù)分析和檢測。如果在 PBMCs 凍存液中加入終濃度為 50U/ml 的超級核酸酶可以有效防止細
胞成團。超級核酸酶不僅沒有蛋白酶的活性，而且不會對健康細胞造成傷害，因此是防止細胞成團的理想選擇。
6.降低大腸桿菌裂解液粘度，改善純化過程中離心難、過濾難的問題：
? ? 大腸桿菌高密度發(fā)酵在增加菌密度的同時提高了重組蛋白的表達量，但是大腸桿菌破碎后釋放的基因組 DNA 會導致裂解液粘度大，加大了離心和澄清過濾的難度。
按照 0.2g 濕菌用 1ml 細菌裂解液重懸菌體，使用高壓破碎儀 1500bar，4℃進行均質(zhì)破碎。如果加入終濃度為 25U/ml 的超級核酸酶，15℃反應 15min，與不加超級核酸酶的細菌裂解液相比粘度降低 50%；如果加入終濃度為 2.5U/ml 超級核酸酶，15℃反應 30min，與不加超級核酸酶的細菌裂解液相比粘度降低 37%。采用混纖膜(MCE)和聚醚砜膜(PES)，孔徑分別為 0.4μm 和 0.8μm 的濾膜進行澄清測試，不加超級核酸酶的細菌裂解液幾乎立即堵塞了濾膜，而終濃度為 25U/ml 的超級核酸酶處理過的細菌裂解液，在過濾時間為 20s 后，0.8μm 孔徑的膜通量可以達到 7400L/m2h，0.45μm 孔徑的膜通量可以達到 4200L/m2h。對于孔徑較小的 0.22μm 濾膜，即使在用 25U/ml 超級核酸酶消化后，過濾時也會立即發(fā)生堵塞，如果一定需要使用 0.22μm 濾膜過濾細菌裂解液，建議先用聚醚砜膜(PES)材質(zhì) 0.45μm 孔徑的濾膜過濾后再用 0.22μm 濾膜過濾，或者需要加大酶的用量或延長孵育時間。
7.提高包涵體蛋白復性率：
? ? 在大腸桿菌中以包涵體形式表達重組蛋白的方法，因其表達量高、蛋白純度高、免受蛋白酶降解和可表達對宿主細胞有毒的蛋白而廣泛應用。在包涵體蛋白變性后復性，即重折疊的過程中，由于細菌裂解液中大量的 DNA 可能會粘附蛋白酶，導致目的蛋白的降解，如果在細菌裂解液中加入終濃度為 1U/ml 超級核酸酶，37℃反應 30min，即可有效降低由于基因組 DNA 而粘附的蛋白酶，提高包涵體的純度，最終提高包涵體蛋白復性率。
8.二維凝膠電泳樣品的制備：
? ? 二維凝膠電泳用于分離復雜的蛋白質(zhì)混合物，分辨率高。核酸是帶負電荷的分子，可以與蛋白質(zhì)表面帶正電荷的區(qū)域相互作用形成復合物，這種核酸-蛋白質(zhì)復合物的形成和形狀很難預測。與純蛋白質(zhì)相比，這些核酸-蛋白質(zhì)復合物在電場中的遷移方式不同，可能會導致蛋白質(zhì)條帶偏移，使二維凝膠電泳的分辨率差。如果按照每 100μl 細胞裂解液加入 50U 的超級核酸酶對樣品進行預處理，可減少水平條紋，顯著提高二維凝膠電泳分離的分辨率。另外，因為所需酶量較少，所以無需擔心超級核酸酶的使用對二維凝膠電泳的結(jié)果的影響。
9.常見問題：
? ? a.在使用過程中，應在哪一步加入超級核酸酶？
? ? 如果“使用說明”中沒有相應的操作，一般是在培養(yǎng)后、捕獲樣品步驟之前添加。
? ? b.在低溫條件下，應在加入多少超級核酸酶？
? ? 溫度低于 37℃時，超級核酸酶的效率會降低，通常情況下，在不增加超級核酸酶使用量的情況下，可以通過延長孵育時間來補償?shù)蜏貢r的酶切效率低。
? ? c.為什么超級核酸酶不起作用？什么會抑制超級核酸酶的活性？
? ? 超級核酸酶在很寬泛的條件下都有酶活性，但是 Mg2?是超級核酸酶的關(guān)鍵催化輔助因子，反應液含有 1-2mM Mg2?對超級核酸酶的酶活性是必須的。Mn2?可以替代 Mg2?，但是只有在 Mg2?存在的情況下，酶才能達到最佳的活性。如果陽離子濃度>300mM、磷酸鹽濃度>100mM、硫酸銨濃度>100mM 或者>1mM EDTA 的情況下，超級核酸酶的酶活性會受到抑制。
? ? d.為什么超級核酸酶的酶活性下降？
? ? 通常來說超級核酸酶是十分穩(wěn)定的，在極少數(shù)情況下酶活性下降。不可逆的酶失活可能是由于樣品中存在變性劑、蛋白酶或者-80℃凍融；可逆的酶失活可能是因為存在螯合劑(如 EDTA)或去除了超級核酸酶的關(guān)鍵催化輔助因子 Mg2?。
? ? e.不小心將超級核酸酶在室溫放置了 2 天還能用嗎？
? ? 本超級核酸酶非常穩(wěn)定。即使在 37℃保存數(shù)周，超級核酸酶也能保持>90%的酶活性，在 25℃保存 10 周后，酶活性基本沒有變化。
? ? f.如何抑制超級核酸酶的酶活性？
? ? 在陽離子濃度>300mM、磷酸鹽濃度>100mM、硫酸銨濃度>100mM 或者>1mM EDTA 的情況下，超級核酸酶的酶活性會受到抑制，但這些都是可逆的酶失活。只有在極端條件下(100mM NaOH，70℃處理 30min)才能實現(xiàn)不可逆的酶失活。
? ? g.如何去除超級核酸酶？
? ? 可以通過下游純化操作來完成，如澄清液的深度過濾、濃縮的切向流過濾(TFF)、濃縮和色譜層析(如離子交換、分子篩、疏水層析)。對于全能核酸酶(≥99%, with His-tag)可以通過鎳柱吸附去除。
? ?h.超級核酸酶是否具有蛋白酶活性?
? ? 否。超級核酸酶沒有檢測到蛋白酶活性，因此在其“工作”期間不會降解目的蛋白。但是如果樣品中存在蛋白酶，可能會導超級核酸酶的不可逆降解。
? ?i.超級核酸酶是否與蛋白酶抑制劑兼容?
? ? 是。但是，由于許多蛋白酶抑制劑中含有 EDTA，而>1mM EDTA 的情況下超級核酸酶的酶活性會受到抑制，因此應謹慎使用。
保存條件：-20℃保存，三年有效。4℃保存，至少兩個月內(nèi)有效，≤0℃運輸
注意事項：
（1）本產(chǎn)品不建議-80℃保存，凍融可能會降低本產(chǎn)品的酶活性。
（2）Mg2?是超級核酸酶的關(guān)鍵催化輔助因子，反應緩沖液含有 1-2mM Mg2?對超級核酸酶的活性是必須的。
（3）參照最適范圍和有效范圍表格，若使用的溶液較為特殊，如為高鹽溶液，或偏酸性、偏堿性，或含有較高濃度的去垢劑、變性劑等，應適當
增加超級核酸酶的用量或孵育時間。
（4）本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
（5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
生物活性：50U/μl
Accession #：P13717
預測分子量：26.7KD
級別：無載體, 生物活性, ActiBioPure?, EnzymoPure?, His標簽
產(chǎn)品規(guī)格參數(shù)
儲存緩沖液：10mM Tris, 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% glycerol, pH7.4.
儲存條件：-20°C儲存,干燥,避免反復凍融
運輸條件：超低溫運輸
穩(wěn)定性與儲存：-20℃儲存（3年）；收貨后建議分裝，避免反復凍融， 密封。
CAS編號和信息：9025-65-4
酶學委員會編號：EC: 3.1.30.2
單位定義：一個單位的超級核酸酶被定義為在 30 分鐘內(nèi)能使 A260 值變化 1.0（相當于完全消化 37 微克 DNA）的酶量。
功能和特點
Accession #：P13717
生物活性：50U/μl
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關(guān)鍵字： 全能核酸酶 ; 超級核酸酶 ; 廣譜核酸酶 ; 活性核酸酶
上海阿拉丁生化科技股份有限公司是A股上市公司（（股票代碼：688179），專注于科研試劑的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售，已陸續(xù)建立多個工廠和研發(fā)中心。作為領(lǐng)軍企業(yè)，阿拉丁始終堅持質(zhì)量第一，連續(xù)13年被評為“最受歡迎試劑品牌”。
阿拉丁目前常備庫存試劑產(chǎn)品品種超過7萬種，SKU總數(shù)超過46萬，產(chǎn)品線涵蓋了化學試劑、生化試劑、藥靶配體、蛋白質(zhì)和抗體等多個領(lǐng)域，是國內(nèi)少數(shù)化學試劑到生物試劑全面發(fā)展的國產(chǎn)試劑品牌，產(chǎn)品同步發(fā)布在我們國內(nèi)外電商平臺。