中文名：SYBR Green I凝膠染色溶液

英文名：SYBR Green I Gel Staining Solution, 10000x

純度：10000 x in DMSO

貨號(hào)：S171397

Cas號(hào)：163795-75-3

存儲(chǔ)溫度：-20°C儲(chǔ)存,充氬

運(yùn)輸條件：超低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品介紹：

SYBR Green I是一種特制的不對(duì)稱花菁染料，用于檢測核酸。這種成分由N-烷基化苯并噻唑或苯并噁唑環(huán)系統(tǒng)組成，通過單次甲基橋連接吡啶鎓或喹啉鎓環(huán)系統(tǒng)。

核酸染料特點(diǎn)：?

1. 相對(duì)安全：花菁染料，實(shí)驗(yàn)顯示在凝膠染?濃度下?致突變性，可以代替致癌物溴化?錠EB作為各種核酸電泳的染?劑。?

2. ?靈敏：紫外凝膠透射儀下靈敏度? EB 染?法 5-10 倍，可?光透射儀下的靈敏度? EB 染?法?20~30 倍。?

3. 信噪??：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，?背景信號(hào)。?

4. 操作簡單：?須脫?或沖洗，即可?紫外凝膠透射儀觀察或可?光透射儀觀察。?

5. 適?范圍?：可適?于多種電泳分析，如瓊脂糖凝膠電泳和 PAGE 凝膠電泳。

6. 使??便：不影響其它修飾酶作?(如：Taq 酶、內(nèi)切酶、T4 連接酶、反轉(zhuǎn)錄酶等)。

核酸染料使用方法：?

1.膠染法(用法同EB)(推薦方法，見圖1) 1) 制膠時(shí)加? Sybr Green I 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右，每 100ml 膠中加?1-3μl Sybr Green I 核酸染料（?圖 1）。?

2) 按照常規(guī)?法進(jìn)?電泳即可。?

3) ?紫外凝膠透射儀或可?光透射儀觀測。藍(lán)光可透過玻璃， 觀測聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，可直接將托有凝膠的玻璃平?放?可?光透射儀內(nèi)觀測。 *注：此?法染?能準(zhǔn)確確定?段分?量且?量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠，每塊膠點(diǎn) 50 個(gè)樣，可做 50000 次。?

2.點(diǎn)染法(見圖3)?

1) 該?法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。?

2) ?作液的配制：?電泳緩沖液將10000×的Sybr Green I 稀釋100倍，即為Sybr Green I ?作液。Sybr Green I ?作液可以置2～8℃保存?個(gè) ?以上, 濃縮液在-20℃保存半年。?

3) 制膠：按常規(guī)?法制膠，不含任何染料。

4) 樣品染?：向分析樣品中加?Sybr Green I?作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使Sybr Green I與樣品中DNA充分結(jié)合。Sybr Green I ? 作液加?量為總上樣量的1/5～1/10。?

5) DNA Marker染?：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μLSybr Green I ?作液混勻，室溫放置5分鐘，使Sybr Green I 與DNA 充分結(jié)合。?

6) 上樣、電泳：按常規(guī)操作。?紫外凝膠透射儀或可?光透射儀觀測。藍(lán)光可透過玻璃， 觀測聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，可直接將托有凝膠的玻璃平 ?放?可?光透射儀內(nèi)觀測。 *注：?點(diǎn)染法染?時(shí)，靈敏度最?，染料?量最少。通常點(diǎn)?個(gè)樣加? 1μL 即 可，可以使? 10000 次, 但??段稍有滯后現(xiàn)象，如果需要更準(zhǔn) 確確定分?量(與 Marker 對(duì)?)，建議使?膠染法。?

3.泡染法?

1) 按照常規(guī)?法進(jìn)?制膠，其中不含任何染料。?

2) ? pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如：TAE, TBE)，按照 1﹕1000 的?例稀釋 Sybr Green I?

3) 核酸染料，混勻，制成染?溶液。?

4) 將染?溶液倒?合適的聚丙烯容器中，放?凝膠，?鋁箔等蓋住容器使染料避光。 室溫振蕩染? 10-30 分鐘，染?時(shí)間因凝膠濃度和厚度? 定。聚丙烯酰胺凝膠直 接在玻璃平?上染?，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆 蓋整個(gè)膠板，并染? 30 分鐘。玻璃 平?必須預(yù)先經(jīng)過硅烷化溶液處理（避免染料 吸附在玻璃表?上）。?

5) ?紫外凝膠透射儀或可?光透射儀觀測。藍(lán)光可透過玻璃， 觀測聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，可直接將托有凝膠的玻璃平?放?可?光透射儀內(nèi)觀測。 *注：?泡染?法染?時(shí)，可以精確確定核酸?段分?量。但染料?量是三種?法中?量最?的。 本品? DMSO 溶解，因?yàn)?DMSO 溶點(diǎn)是 18.3℃，使?前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。??

核酸染料使用注意事項(xiàng)：?

1. Sybr Green核酸染料樣品點(diǎn)染?法中，電泳不要超過 2 ?時(shí)，以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來，產(chǎn)?彌散狀條帶。?

2. ?點(diǎn)染?法染?時(shí)，條帶稍有滯后現(xiàn)象，如果需要確定?段精確分?量（和 Marker 對(duì)?），建議?膠染法和泡染法。?

3. 常規(guī)?酒精沉淀核酸過程中，Sybr Green I 核酸染料可以全部從核酸上去掉。?

4. DNA電泳請(qǐng)選擇 Sybr Green I 染料，RNA 電泳請(qǐng)選擇 Sybr Green II染料，兩種染料不通?。?

5. Sybr Green I 核酸染料對(duì)玻璃和?聚丙烯材料具有?定親合?。建議在稀釋、貯存、染 ?等使?過程中?聚丙烯類容器。?

6. 可以加Orange Red 作為標(biāo)記. pH值在7.5-8.3之間,不要微波加熱,加?熱膠的溫度低于50度。

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