甘油激酶—9030-66-4

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中文：甘油激酶

英文：GK

CAS：9030-66-4

分子式：C3H8O3

純度：≥90%

貨期：24h

貨號(hào)：HH1205-01

規(guī)格：5ku

中文同義詞：甘油激酶; 甘油激酶GK;

英文同義詞：GK; GLK; HK4; HHF3;

技術(shù)指標(biāo)

外觀：白色或淡黃色無定型凍干粉末蛋白純度：≥90%; 比活性：≥15 U/mg 酶粉; 過氧化氫酶：≤0.001%; 尿酸酶：≤0.01%; 己糖激酶：≤0.01%; ATP 酶：≤0.005%

酶學(xué)性質(zhì)

來源：微生物; 分類：EC 2.7.1.30; 分子量：55 kDa(SDS-PAGE); 等電點(diǎn)：5.0; Km值：4.4×10-5 M(Glycerol), 3.7×10-5

M(ATP); 抑制劑：Ag+，Hg2+; 最適：pH 7.5

用途：用于甘油三脂試劑的研發(fā)和大量配制。

酶活定義:單位酶活定義為在下述條件下，每分鐘消耗1μmol甘油所需的酶量。

試劑準(zhǔn)備

試劑I：0.3 M 甘油（稱取0.552 g 甘油用純水定容到20 mL）。

試劑II：純水配制1 kU/mL POD。

試劑III：50 mM TOOS（1.477 g TOOS 溶于 100 mL UP水）。

試劑IV：50 mM 4-AA（1.016 g 4-AA溶于 100 mL UP 水）。

試劑V：20 U/mL甘油-3-磷酸氧化酶。

試劑VI：200 mM HEPES，含 20 mM MgCl2 和 40 mM ATP（0.953 g HEPES，0.076 gMgCl2，0.44 g ATP，用10 mL 水溶解，用 NaOH 調(diào)節(jié) pH 至 7.9，定容到 20 mL）。

按如下配制反應(yīng)混合物：

試劑VI：10 mL; 試劑I: 1.67 mL; 試劑II: 400μL; 試劑III: 3 mL; 試劑IV: 3 mL; 試劑V: 40 mL; 雙蒸水定容至 100 mL

酶稀釋液：20 mM, pH 7.5 磷酸鉀緩沖液。樣品：用酶稀釋液將酶稀釋至 0.2-0.4 U/mL。

操作步驟

1. 在 1 mL 比色皿中加入 1.0 mL 反應(yīng)混合物。

2. 37℃溫浴2 min。

3. 加入0.02 mL待測(cè)樣品，混勻。

4. 用分光光度計(jì)在555 nm測(cè)定樣品1 min內(nèi)的吸光度變化 ΔAs。

*用 酶稀釋液替代酶液，其它步驟相同，所得溶液吸光度為空白吸光度 ΔAb。ΔA=ΔAs-ΔAb