品名：Super-GST? GST 蛋白純化 Kit，貨號(hào)：P0007，品牌：Engibody
訂購(gòu)及技術(shù)咨詢：朱小鷗，13817407320(微信同號(hào))
保姆級(jí)GST 蛋白純化試劑盒
Super-GST? GST 標(biāo)簽蛋白純化試劑盒的優(yōu)勢(shì)
1、本試劑盒中包含特殊配方的雷霆細(xì)菌裂解液，可快速裂解大腸桿菌并完全釋放可溶型GST標(biāo)簽蛋白及包涵體（無(wú)需超聲破菌，無(wú)需加熱，快速溫和，完全裂解。盒內(nèi)裂解液5-10分鐘內(nèi)即可高效裂菌并完全釋放GST標(biāo)簽融合蛋白）。
2、本試劑盒可以通過(guò)溫和的、非變性的洗脫條件得到目的蛋白。最大程度保留蛋白活性。
3、試劑盒中的GSH填料可以重復(fù)使用10次以上。
4、本試劑盒是一個(gè)Complete All-In-One Kit — 包含全部試劑，高效細(xì)菌裂解液、平衡緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液、洗脫劑、GSH填料、重力空柱（帶控流閥）以及下游WB檢測(cè)所需的高特異性GST小鼠單抗。
讓GST蛋白純化變得簡(jiǎn)單高效！
第一部分：背景簡(jiǎn)介及應(yīng)用場(chǎng)景
谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)是一個(gè)由211個(gè)氨基酸組成的大小為26kDa序列，它是一種廣泛使用的可提高靶蛋白的溶解度親和標(biāo)簽。GST標(biāo)簽與固定化的谷胱甘肽GSH具有親和力，常用于原核表達(dá)。它可以與一個(gè)蛋白的N端或C端融合。
谷胱甘肽親和是一種有效的一步純化GST(谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶)標(biāo)簽蛋白的方法。GST可作為一種可溶性蛋白在大腸桿菌細(xì)胞質(zhì)中大量表達(dá)，并具有完全的酶活性。此外，許多在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)不溶的真核蛋白，在表達(dá)為GST標(biāo)簽蛋白時(shí)被證明至少部分可溶。
重組標(biāo)簽蛋白純化利用谷胱甘肽GSH的結(jié)構(gòu)能夠和GST（谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶）結(jié)合位點(diǎn)互補(bǔ),谷胱甘肽偶聯(lián)在瓊脂糖介質(zhì)上,帶有GST的標(biāo)簽蛋白與瓊脂糖介質(zhì)上交聯(lián)的谷胱甘肽配體互補(bǔ)性結(jié)合,這種可逆性的結(jié)合在溫和、非變性的條件下通過(guò)參加還原型谷胱甘肽競(jìng)爭(zhēng)性洗脫下來(lái),雜質(zhì)通過(guò)洗滌緩沖液被去除,從而純化富集目的蛋白。
GST 標(biāo)簽純化蛋白的優(yōu)點(diǎn)
1）、GST標(biāo)簽蛋白能提高蛋白的溶解度，可把一些難溶蛋白變成可溶性蛋白，使實(shí)驗(yàn)變得具有可行性。
2）、GSH谷胱甘肽偶聯(lián)磁珠親和力強(qiáng)，洗脫純度高，且是非變性、溫和、競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，有利于保持蛋白活性。
3）、可用蛋白酶進(jìn)行去除。
4）、適用范圍廣，可在不同宿主中高效表達(dá)。
5）、一般來(lái)說(shuō)，使用一步純化出的GST標(biāo)簽蛋白純度高于一步純化出的His標(biāo)簽蛋白純度。
GST 標(biāo)簽純化蛋白的缺點(diǎn)
1）、融合表達(dá)的GST標(biāo)簽，肽鏈較長(zhǎng)，大到26kD，可能會(huì)改變目的蛋白的天然構(gòu)象。
2）、僅能純化可溶性蛋白，若蛋白不可溶，則很難用變性的方法純化。因?yàn)橐坏⒛康牡鞍鬃冃?，則GST標(biāo)簽也會(huì)被變性，那么就會(huì)失去生物活性，也就無(wú)法結(jié)合GSH填料了。
第二部分：技術(shù)原理
無(wú)論是大腸桿菌或者其他宿主細(xì)胞中，天然表達(dá)的還是重組表達(dá)的，各種來(lái)源的GST標(biāo)簽蛋白，都可以用固定的谷胱甘肽親和層析法純化，然后用過(guò)量的還原性谷胱甘肽GSH競(jìng)爭(zhēng)洗脫。使用以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)的Glutathione Agarose Resin 6FF介質(zhì)，可以在相對(duì)較高流速的情況下，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的純化。此介質(zhì)通過(guò)標(biāo)簽與配體結(jié)合，緩沖液洗脫去除雜質(zhì)，然后標(biāo)簽蛋白在溫和且非變性的條件下被洗脫，使得蛋白的抗原性能和功能活性得到保護(hù)。
GST標(biāo)簽的去除
如果GST標(biāo)簽需要切除，包含 PreScission 蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)、Thrombin識(shí)別位點(diǎn)或Factor Xa識(shí)別位點(diǎn)的標(biāo)簽蛋白可以在與GSH填料柱結(jié)合時(shí)或在洗脫后進(jìn)行標(biāo)簽去除。一般來(lái)說(shuō)，柱上切割是推薦的方法，因?yàn)樵S多潛在的雜質(zhì)都能被洗掉，目的蛋白洗脫時(shí)具有更高的純度。如果切割條件需要優(yōu)化，建議在洗脫后進(jìn)行標(biāo)簽去除。
第三部分：技術(shù)流程
第四部分：實(shí)驗(yàn)結(jié)果與示例展示
圖注如下：
GST-tagged protein purification from whole cell extracts. Whole cell extracts containing GST-DHFR (left) and GST alone (right) were loaded, washed, and eluted from glutathione resin columns. Then, the resulting purification fractions were analyzed by SDS-PAGE (A & B) and Western blot with an anti-GST IgG (C & D).
第五部分：GST 蛋白純化試劑盒組分清單
（共計(jì)10個(gè)組分，均可單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)）
| 編號(hào) | 組分名稱 | 數(shù)量 | 保存 | 注意事項(xiàng) |
| 下列組分收到后需儲(chǔ)存在 4 °C中。 |
| P3401 | Glutathione Agarose Resin 6FF (GSH填料) | 5 mL | +4 °C | 50% slurry，含有2.5mL settled resin，填料可以重復(fù)使用10次以上 |
| GST-01 | Binding / Equilibration Buffer for GST Protein (BE緩沖液for GST Protein) | 100 mL | +4 °C |
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| GST-02 | Wash Buffer for GST Protein | 250 mL | +4 °C |
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| GST-03 | Elution Buffer for GST Protein | 100 mL | +4 °C | 溫和非變性洗脫液 |
| GST-04 | TCEP | 250 mg | +4 °C |
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| 下列組分收到后需儲(chǔ)存在室溫中 |
| PURI-04 | 重力柱空柱(12mL)及控流閥 | 1個(gè) | 室溫 |
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| PULL-04 | 還原型谷胱甘肽 | 307 mg | 室溫 | 按需稱取溶解，易于氧化失效 |
| IF9217 | QuickStain? One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE膠快速染色液（用于顯示蛋白條帶） | 50mL | 室溫 | 超快染色蛋白膠，靈敏度極高，10分鐘即可讓低至10ng的蛋白顯示條帶 |
| 下列組分收到后必須要儲(chǔ)存在 -20 °C中 |
| Lysis-01 | 雷霆大腸桿菌裂解液
Bacterial Lysis Buffer for Purification | 50 mL | -20°C | 超級(jí)強(qiáng)大，直接裂解大腸桿菌釋放蛋白，含有溶菌酶及核酸酶，必須-20度保存 |
| AT0027 | Anti-GST小鼠單克隆抗體 | 25 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測(cè) |
| AT0098 | 山羊抗小鼠二抗HRP標(biāo)記 | 100 μL | -20 °C | 用于下游WB檢測(cè)
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關(guān)鍵字： GST融合蛋白;蛋白表達(dá)純化;GST蛋白純化試劑盒;GSH;GSH填料;
復(fù)名表觀遺傳學(xué)（上海復(fù)名醫(yī)療科技有限公司），專注于表觀遺傳學(xué)研究工具的開(kāi)發(fā)和表觀技術(shù)服務(wù)的提供。
經(jīng)過(guò)多年和全球著名大學(xué)表觀研究領(lǐng)域?qū)＜医淌诘慕涣骱吞接?，積累經(jīng)驗(yàn)，精準(zhǔn)解決表觀研究工具領(lǐng)域的痛點(diǎn)難點(diǎn)，在表觀基因組學(xué)、表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)和表觀蛋白組學(xué)領(lǐng)域均開(kāi)發(fā)了一系列研究試劑盒并提供表觀技術(shù)服務(wù)，和哈佛大學(xué)，華盛頓大學(xué)，斯坦福大學(xué)，麻省理工學(xué)院，UCSC，UCSF，HHMI，德國(guó)海德堡大學(xué)，法國(guó)國(guó)家健康與醫(yī)學(xué)研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所開(kāi)發(fā)的抗體，試劑，試劑盒受到了全球客戶的歡迎。
Engibody為復(fù)名表觀遺傳學(xué)旗下品牌，所開(kāi)發(fā)的抗體，試劑，表觀試劑盒在全球范圍內(nèi)銷售，受到眾多世界著名大學(xué)課題組老師及醫(yī)藥500強(qiáng)巨頭的認(rèn)可和喜愛(ài)。
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