超氧陰離子清除能力試劑盒說明書

微量法100T/96S

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產(chǎn)生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、

核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞，與機(jī)體衰老和病變有很密切

的關(guān)系，清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注。

測(cè)定原理：

AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子，與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－與對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的

作用生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光

值呈負(fù)相關(guān)。

試劑二臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解混勻；

自備儀器和用品：

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

樣品處理：

1.組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入

提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml

提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g

離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3.培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測(cè)。

粉劑藥物可配制成相同濃度，比如1mg/ml

測(cè)定操作表：

注意事項(xiàng)：

1.試劑一4℃可保存2個(gè)月，配制好的試劑二4℃可保存一周，建議實(shí)驗(yàn)前配制，并盡快使用。

2.樣品處理完后立即進(jìn)行測(cè)定，或者低溫保存不超過24小時(shí)。