乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/24樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測(cè)定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
試劑的組成和配制：
產(chǎn)品名稱(chēng) | CE003-50T/24S | Storage |
提取液 | 30ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1支 | -20℃ |
試劑三：液體 | 15ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑五：液體 | 100μl | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時(shí)加入10μl試劑五和1.3 ml蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為1000~5000：1的比例（建議2000萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱(chēng)(μl) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 |
|
蒸餾水 |
| 50 |
充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴15min
充分混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴15min
充分混勻，室溫靜置15分鐘，450 nm下測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
LDH活力單位的計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸曲線(xiàn)， y = 0.9108x+0.0037 (x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，umol/ml；y為ΔA)。
2、血清（漿）LDH活力的計(jì)算
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（nmol/min/ml）=（ΔA-0.0037）÷0.9108÷T×103=73.2×ΔA
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中LDH活力的計(jì)算
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（nmol/min/mg prot）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =73.2×ΔA÷Cpr
需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
（2） 按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（nmol/min/g鮮重）=[（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =73.2×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。
LDH（nmol/min/104 cell）= [（ΔA-0.0037）÷0.9108×V1]÷(2000×V1÷V2)÷T×103 =0.037×ΔA
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬(wàn)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為：0.1 umol/ml -2 umol/ml。2、ΔA線(xiàn)性范圍為：0.01 -2。
關(guān)鍵字： Lactate dehydrogenas; 乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)試劑盒;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專(zhuān)家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車(chē)間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷(xiāo)市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶(hù)的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶(hù)為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。