總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法 50管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測(cè)定原理：
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類(lèi)化合物；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | FA021-50T/48S | Storage |
試劑一：異丙醇（自備） | 50ml | -- |
試劑二：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1瓶 | 4℃ |
試劑四：液體 | 100μl | 4℃ |
TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體 | 1ml | 4℃ |
說(shuō)明書(shū) | 一份 |
TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體1ml×1支，0.5μmol/ml，4℃保存。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
TC的提取：
1、組織中TC的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000xg 4℃離心10min，取上清，即TC待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC的提取：先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1ml試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），即TC待測(cè)液。
3、血清（漿）等樣品：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. TC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8ml試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl TC標(biāo)準(zhǔn)液和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl TC待測(cè)液和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
5. 空白管：依次在1ml玻璃比色皿中加入100μl 試劑一和900μl TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
1. 血清（漿）中TC含量：
TC（μ mol /dL）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×100
= 50×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；100 ml：1dL=100 ml。
2. 組織中TC含量：
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TC（μ mol/mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TC（μ mol / g鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g/ml
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中TC含量：
TC（μ mol /104 cell）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml。
注意事項(xiàng)：
最低檢出限為1nmol/ml。
關(guān)鍵字： 總膽固醇含量測(cè)定試劑盒;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專(zhuān)家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車(chē)間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷(xiāo)市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專(zhuān)業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。